鸡球虫卵囊分离纯化与单卵囊制备技术的改进.pdfVIP

维普资讯 试验研究 鸡球虫卵囊分离纯化与单卵囊制备技术的改进 李亚男，李春雨 (1．辽宁省风沙地改良利用研究所，辽宁 阜新 123000； 2．阜新高等专科学校农业职业技术学院，辽宁 阜新 123000) 中图分类号 S852．72*3 文献标识码 B 文章编号 1672-9692(2008)08—0006—02 f 钳·’嚣·每 母， 韬。 年 ‘ 车 ；和 。0 。诤 ， ‘’ ‘ 1‘弓， 钳 萄‘ 每 9 望 铥 ≯ [摘 要]鸡球虫病是严重危害和制约养鸡业发展的寄生虫病之一，凡是有养鸡的地 蔓方就有不同程度的鸡球虫病发生，特别是在集约化养鸡场，其发病率可达到50％-7o％，妻 ≯死亡率也达20％30％，严重时高达80％。对鸡球虫卵囊的分离纯化及单卵囊的制备工作 霹 ≮是进行球虫病研究分析的主要工作，也是必备的工作。同时，球虫卵囊的分离技术是鉴 别球虫的种类和建立球虫的纯种体系、调查某地区内球虫种类和获得球虫的纯种体系的 l 重要手段，对进一步研究球虫的致病性、药物效应、产生的耐药性和禽体对球虫的免疫 纂 性、以及对抗球虫药的开发和球虫疫苗研制有重要意义。在结合科研实践的基础上对鸡 §球虫卵囊的分离纯化及单卵囊制备的操作方法进行改进，改进后提高了虫卵的回收率及 单卵囊制备成功率，减化了工作流程。 [关键词]鸡球虫；卵囊；分离；纯化；制备方法 ∥ 乜 ．e ．．．^ 毛 ． 乜 乜 ．啦 ． 如 蚝 如 魂 魄 如 西蹙 鸡球虫卵囊 的分离纯化及单卵囊 的制备 方法在进行球虫病研究分析方面是极为重要 的工作，特别是在研究鸡球虫基 因工程方面 更为重要。在综合分析 目前各研究机构 的操 作方法的基础上，通过大量 的实践操作找到 了一套理想的操作方法。改进后的操作方法 有 以下几大特 点：卵囊 回收率大大提高，卵 囊的纯化操作流程得 以简化，单卵囊的制备， 成功率更高。 1 改进后的鸡球虫卵囊回收方法的基本操作 过程 球虫卵囊存在于粪便及肠道组织中。对于粪 时间一般在4～6h，在夏季为防止粪便发酵，可 便中的卵囊一直以来多采用饱合食盐溶液漂浮法 减少浸泡时间。浸泡后经 240目与 300目筛网两 或离心法；分离组织中的卵囊一般采用铬硫酸分 次初级过滤后备用，进行初步分离工作。在这一 离法和蛋白酶消化法。本试验采用饱合盐水漂浮 操作环节里要注意两个问题：一是要注意浸泡的 法分离粪便 中的球虫卵囊 。对初步分离得到的卵 时间，保证能把粪便充分的浸泡开；另外就是要 囊样品可用于球虫卵囊的检查，但对于做分子生 在用筛网过滤前充分的搅拌均匀，不出现大块的 物学研究等工作还需要进行纯化，以便于在试验 结粪，以保证最终虫卵的回收数量。 中能得到很好地利用。通过对不同纯化方法的比 1．2 鸡球虫卯囊的初步粗分离 较，其中采用蔗糖溶液梯度离心法效果理想 。纯 1．2．1对粪便滤液进行初步的离心沉淀 500r／min， 化方案经过在试验过程中的不断优化得到很好的 离心 15min。)。 效果。具体操作按下述步骤进行。 1．2．2 得到的粪便滤液沉淀弃去上清液 ，加 1 1．1 粪便浸泡过滤和初步分离 将采集来的新 倍体积的饱合盐水搅拌均匀后离心沉淀 (6000dmin， 鲜鸡粪样本与 自来水混匀并进行充分浸泡。浸泡 10min，反复进行 2 。 1．2．3 分离上清液，弃去沉淀 ，在上清液 中加 2008。8 维普资讯 入4倍体积 的蒸馏水再次离心 (9000r／min， 离