核盘菌对油菜与向日葵的侵染及其致病性分化研究.pdfVIP

核盘菌对油菜和向日葵的侵染及其致病性分化研究 李永红王灏 李建厂 王道杰 李殿荣 陕西杂交油菜研究中心，大荔715105 核盘菌[Sclerotiniasclerotiorum(“6)deBary]具有十分广泛的寄主范围，它能造成油菜、 向日葵、大豆等油料作物的重大经济损失。在我国，菌核病造成油菜产量常年损失10％～ 20％，重病年可达50％，向日葵产量损失可达30％左右(向日葵主产区)。严重影响了油菜、 向日葵的生产。因此，在生产上迫切需要培育抗(耐)菌核病的优良品种。国内外育种工作 者，为此，付出了巨大的努力，然而，其工作进展与生产要求存在较大差距，在对病原菌致病 力分化，抗源发掘，抗性遗传、抗性鉴定等研究方面仍不够深入系统。李国庆等对不同地域 或不同寄主上来源的核盘菌进行研究认为，不同核盘菌菌株在油菜上的致病性没有质的分 化，绝大多数菌株的致病性很强，差异不明显。HuangH．C和LhE．Garrabrandf等分别在向日 葵和莴苣上发现了产生褐色菌核(tan—sclerotium)的核盘菌菌株，其在存活、萌发和致病性 等方面均不同于产生黑色菌核的核盘菌菌株。Steadman等研究认为，由于苜蓿、大豆、油菜、 向13葵等植物生长习性的不同而存在对菌核病避病性的差异。近年来我们在陕西大荔县的 油菜与大豆、油菜与向日葵的轮作田中发现，核盘菌对油菜和向日葵的侵染很强，但却不侵 染大豆，而在新疆阿勒泰地区核盘菌对向日葵的侵染很强，但对油菜和大豆的侵染却较轻， 对此我们做了进一步的研究，以探讨其菌株的特性及致病性分化，为油菜的合理轮作提供 依据。 1材料与方法 1．1供试菌株及来源 油菜上的18个核盘菌菌株均来自陕西大荔。向日葵上的22个核盘菌菌株分别来自陕 西大荔和新疆阿勒泰曾种过油菜的田块。它们均为两地菌核样品的不同单菌核分离物。 1．2培养特性比较 用PDA培养基活化各菌株，取生长活跃的菌丝(琼脂块直径为6mm)移接于含定量PDA (25ml／iIⅡ-)的培养皿中央，在22％下培养。每8小时测量一次菌落直径，以计算菌丝生长速 度，并观察菌落形态和菌核的产生，重复4次；选择生长特性不同的代表菌株各数个转接于 含定量马铃薯蔗糖培养液中，置23。C下恒温振荡培养，5天后收集菌丝测定菌丝生长量，并 按Bateman的方法测定菌丝产草酸量，重复4次。 1．3亲和性测定 取各核盘菌株的菌丝(琼脂块直径为6mm)两两配对移接于PDA平板上，在22。C下培 养，观察同一菌株或不同菌株的菌丝体间的亲和性，并按1、2、3级分别记录其亲和类型。 核盘菌对油菜和向日葵的侵染及其致病性分化研究 57l 1．4致病性测定 供试的油菜品种有秦油二号、秦优7号、中油821；大豆品种秦豆8号均由陕西省杂交油 菜研究中心提供。供试的向日葵品种G101、F51、F52由陕西省种子管理站提供。采用离体 叶片法测定各类代表菌株对油菜、向日葵和大豆的致病性，每菌株接种25个叶片，重复3 次。在接种后48小时、72小时分别对叶片上的病斑直径进行测量，并以不同作物为类别， 计算其平均值以表示不同菌株对各作物的致病性强弱。 1．5 DNA提取 参照王灏等的方法。在马铃薯蔗糖培养液上培养各代表性菌株(22℃)，待菌丝布满液 面后钩出菌丝，用无菌蒸馏水浸洗2次，再用滤纸吸去菌丝上的水分，液氮研磨提取。 1．6 RAPD分析 1．6．1反应体系 ramol／LdNTP 20出的反应体系中含有10×buffer2．O止，2．5 lOmer随 1．Ova，12．5pmol／L 机引物1一，lu的TaqDNA聚合酶，20rig模板DNA。 1 6．2反应程序 分钟。 1．6．3电泳检测 取12山反应产物，与3VJ溴酚兰(含0．25％溴酚兰、40％蔗糖水溶液)混匀，点人含 0．5．g／mlEB的1．4％琼脂糖凝胶中，在5V／m电场强度下电泳1—2小时，取出凝胶，紫外 透射仪上观察照相。并将图谱中各位点扩增条带的有、无分别记为1-．0。 1．7数据分析 各菌株之间的亲和性值和RAPD扩增结果，分别按西北农林科技大学袁志发教授提供 的多元统计分析