黄芩苷抗白色念珠菌作用靶位地研究.pdfVIP

第四届全国中医药免疫学会研讨会论文汇编 黄芩苷抗白色念珠菌作用靶位的研究 吴秀珍1·2 傅颖媛1·△ (1南昌大学医学院免疫学教研室，南昌，330006；2江西护理职业技术学院，南昌，330029) 【摘要】目的l探索黄芩苷抗白色念珠菌作用靶位，为日益增多的白色念珠菌感染性疾病的防治提 供理论依据。方法l l、参照NCCLSM．27A方案推荐的《酵母菌液基稀释法抗真菌药物敏感实验》 测定黄芩苷对白色念珠菌的MIC；2、采用Fura-2荧光探针技术检测黄芩苷对白色念珠菌细胞内游离 Ca2+浓度的影响：3、透射电镜观察黄芩苷对白色念珠菌超微结构的影响。结果l1、黄芩苷对白色念 MIC、1／2MIC、1 珠菌的MIC为lmg／ml；2、1／4 MIC黄芩苷浓度组白色念珠菌胞内游离Ca2+浓度明 显高于未加药物组(P0．05)，且表现为黄芩苷浓度越高细胞内游离Ca2+浓度越高趋势；不同时间组间 MIC黄芩苷作用白色念珠菌12h透射电镜下可见 渐升高，但48h胞内游离Ca2+浓度反而下降；3、1 h可见细胞壁有缺损，胞质内有空泡状结构及斑片状低电子密度区 细胞壁和细胞膜开始出现皱缩；24 形成；48h细胞壁界限模糊，部分溶解，细胞器及细胞核消失，整个细胞坏死，溶解。结论： 1、黄 芩苷在体外有良好的抗白色念珠菌作用；2、黄芩苷在一定浓度范围内，能明显增加白色念珠菌细胞 内游离Ca2+含量；3、黄芩苷通过破坏白色念珠菌的细胞壁使其超微结构发生明显的变化。 白色念珠菌是人体的正常菌群，也是常见的深部感染的条件致病性真菌。近年来，随着放疗、化‘i 疗、免疫抑制剂及广谱抗菌素的广泛应用等，极易造成免疫功能低下者体内环境平衡紊乱，菌群失调， 使白色念珠菌感染呈上升趋势，已跃居真菌感染的第一位【“】。为此，白色念珠菌感染的治疗引起国 内外学者的高度关注。 黄芩是祖国医学中常用中药，来源丰富、价廉，药理学研究表明黄芩及其有效成分黄芩苷不但具 有抗炎，抗菌，解热，镇静，降压，利尿，利胆，保肝以及调节免疫等作用【洲，而且具有良好的抗 真菌作用。但有关黄芩苷对白色念珠菌抗菌作用靶位及作用机制的研究迄今未见报道。本试验拟采用i Fura-2荧光探针技术检测细胞内游离Ca2+浓度的变化，透射电镜观察黄芩苷作用白色念珠菌后其超微 结构的变化，进一步探究黄芩苷对白色念珠茵的作用靶点，为日益增多的白色念珠菌感染性疾病的防 治提供实验依据。 1材料与方法 1．1材料 实验菌种：白色念珠菌标准株2．2086，购自中国预防医学科学院。 l％锇酸、醋酸双氧铀．硝酸铅溶液购白天津化学试剂有限公司：培养基为沙氏葡萄糖琼脂培养基；其 他试剂均为分析纯。 型) 1．2方法 1．2．1最低抑菌浓度(MIC)测定： 1(2。 参照文献【101用微量液基稀释法测定黄芩苷对白色念珠菌的M 1．2．2黄芩苷作用白色念珠菌后胞内游离Ca2+浓度的测定t 取对数生长期的白色念珠菌，再加入沙氏液体培养基及药液至10．0ml，使其终浓度为1x107cfu／ml， ．51． 第四届全国中医药免疫学术研讨会论文汇编 置35℃培养至相应时间后收集白色念珠菌。重悬于一定体积的PBS液中，调整浓度至2x10％fu／ml。取 荡。然后用PBS液洗去胞外残留的Fura-2／huM。将负载后的白色念珠菌悬液，吸入石英比色管中，用 色念珠菌细胞内的负载情况，并记录340rim处荧光强度值，以表征白色念珠菌细胞内游离Ca2+浓度。 所有数据用z：is表示，输入计算机，用SPSSl1．5统计软件进行统计学处理。 1．2．3透射电镜标本的制备： lVlIC)黄芩苷作用白色念珠菌，35(2分别培养12、24、48h，同时设立无药物对照 用lmg／mL(1 组。培养至相应时间后收集白色念珠菌，1000r／nfin离心5rain，去上清，沉淀用无菌PBS液再洗涤2 次。加入2．5％戊二醛进行预固定，然后用1％锇酸进行后固定，再逐级用乙醇和丙酮脱水，树脂包埋， 制备成超薄切片，醋酸双氧铀．硝酸铅溶