实验一水处理中生物相的观察与微生物测量.docVIP

实验一 水处理中生物相的观察与微生物测量 一、实验目的和要求 学习普通光学显微镜的使用和保养方法；学习观察活性污泥中生物相、要求辩认菌胶团、丝状菌、原生动物的形态，学会生物图的绘制；观察示范标本，辨认微生物的大类形态；学习测量微生物大小的方法和使用计数板测量微生物的生物量方法。 验证性实验，实验时数可安排为4学时。 二、实验设备与仪器 1．显微镜、生物摄影显微镜、计算机； 2．SBR生物反应器、曝气设备、活性污泥； 3．示范标本； 4．目测微计、物测微计、血球计数板； 5．擦镜纸、滤纸、烧杯、滴管、载玻片、盖玻片、酒精灯。 三、实验前准备工作 1. 预习实验指导书《实验一》的内容。 2. 复习课堂教学有关活性污泥的组成、活性污泥在水处理中的作用等内容。 四、实验注意事项 1. 本项实验主要内容是学会使用生物显微镜观察微生物。显微镜是精密仪器，尤其是显微镜镜头使用操作不当，容易损坏。上课前学生不要擅自使用显微镜，实验中应严格按照教师指导的方法操作。 2. 学生在实验过程中应注意观察，随时记录，如，记录显微镜观察时的放大倍数，绘出微生物的形态等。 3. 为了防止误食，严禁在实验室内吃东西或喝水。 五、实验原理 1．显微镜的构造与光学原理（参见教材P144-145） 显微镜由机械装置和光学系统两部分组成。 （1）机械装置 ①镜筒：镜筒长度是160mm。镜筒上端装目镜，下端接转换器，转换器（回转板）上有3~5个孔，可安装物镜头。 ②载物台：玻片和标本放在载物平台上，两旁有弹簧夹，可固定玻片。载物台上自动推物器可使玻片上、下、左、右移动。 ③调节器：可调节玻片与物镜之间的距离，大调节器又称粗调节器，升降幅度大，小细调节器属微调节器，升降幅度小，一般调焦距时才用。 （2）光学部分 ①目镜：安装在镜筒上，一般有3种规格，“5×”、“10×”、“15×”，分别表示镜头放大倍数为5倍、10倍、15倍。一般常用10×目镜。 ②物镜：安装在转换器上。物镜可分低倍镜（8×、10×、20×）、，高倍镜（40×、45×、60×）、油镜（100×）三种。 物镜的性能由数值孔径（numerical aperture, N.A.）决定，数值孔径（）。NA数值孔径越大，显微镜效能越大。n 折射率是影响数值孔径的因素。空气折射率n=1，水的折射率n=1.33，香柏油折射率n=1.52，当光线入射角度，则，则 以空气为介质时： 以水为介质时： 以香柏油为介质时： 显微镜的性能还依赖于物镜的分辨率，即能分辨两点之间的最小距离的能力。分辨率用表示。（为波长），一般可见光波长在0.38~0.7，是不能缩短的，所以只有通过增大N.A.来提高分辨率，（分辨率值越小越好）。 物镜上标有N.A.1.25、100×、“OL”、160/0.17、0.16等字样，其中N.A.1.25是数值孔径，100×是放大倍数，“160/0.17”中160表示镜筒长，0.17表示要求盖片厚度为0.17mm。“OL”表示油镜。0.16是工作距离。 显微镜的总放大倍数为物镜放大倍数和目镜放大倍数的乘积。 ③聚光器：安装在载物台下方。聚光器可集合反光镜反射率的光线，可上、下调整，调节光线强弱，光线过强时，将聚光器向下移动。 ④反光镜：可反射光线到聚光器上。当光源为自然光时用平面镜，光源为灯光或使用油镜头时，用凹面镜。 ⑤滤光片：可选用合适的滤光片，以提高分辨力，增加反差和清晰度。 六、实验内容 1．观察活性污泥中生物相、辩认菌胶团、丝状菌、原生动物的形态，学会生物图的绘制； 2．观察放线菌、真菌、藻类的形态； 3．学习测量微生物大小的方法； 4．学习使用计数板测量微生物的生物量方法。 七、实验方法与步骤 1．显微镜的操作方法： （1）低倍镜的操作 1) 调光：旋动转换器，将低倍镜移至镜筒正下方→ 转动反光镜对着光源处集光→ 眼睛对准目镜（10×），转动反光镜使视野变亮。 2) 观察物体：将玻片放在载物台上→ 标本放在载物台上圆孔的正中央→ 眼睛从侧面注视物镜头 →使用粗调节器使镜头下降，注意防止物镜与玻片相碰 → 眼睛对着目镜观察视野 → 使用粗调节器使镜筒上升（即使镜头与载物台分开）→ 注意观察图像 → 再用细调节器调整焦距，使图像清晰 → 观察生物相。 （2）高倍镜头使用： 用低倍镜找到所要观测的图像→ 慢慢旋转转换板将物镜转换成高倍镜头（40×）→ 再用细调节器调清图像→ 观察生物相。 （3）显微镜使用注意事项与保护方法： 1）当眼睛对准目镜头观察时，千万不能使用粗调节器使镜筒与载物台相碰撞（否则将会损坏镜头），即观察时应该使物镜头与载物台分离，防止物镜压碎载玻片。 2）镜头应用擦镜纸擦试。 3）用完显微镜后，应将载物台上载玻