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实验三小规模制备质粒DNA.doc
实验三 小规模制备质粒DNA
(碱变性-SDS法、SET法)
目的
学习几种小规模制备质粒DNA的技术，比较这几种方法所制备的几种质粒DNA的效果。
原理
在本章第一节介绍的载体中，有PUC系列、PBS与PBR322均属拷贝数较高的质粒，只要用小规模制备一次的质粒DNA，就有足够的量用于常规的基因工程操作。小规模制备质粒DNA的特点是可以一次制备多种质粒DNA(12—24个不同的质粒DNA样品)，速度快，时间省，步骤简化，DNA纯度好，可以用于酶切、连接，甚至多纯化几次还可做双链DNA序列分析的模板等常规基因工程操作之用。
其中碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分 离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。? 接种针 ? ? ? ? ? ? ? 1ml移液管 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1.5ml Eppendorf管 ? ? ? ? 200ml吸头 ? ? ? ? ? ? ? 冰块 ? ? ? ? ? ? ? ? 牛皮纸 ? 纱布盖 ? ? ? ? ? ? ? 线绳微量移液器 ? ? ? ? ? ? 涡流混合器 低温高速离心机1.5ml??Eppendorf?管培养皿苄
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