5-羟色胺在大鼠海马CA1、CA2和CA3表达.pdfVIP

1、CA2和CA3的表达 5．羟色胺在大鼠海马CA 硕士生姓名：易传安 指导教师：王 滨 教授 指导小组：马晓凯 高级实验师 专业名称：人体解剖与组织胚胎学 摘 要 目的：大鼠海马属于脑的边缘系统，包括CAl、CA2和CA3。在结 构上无明显分界标志，功能上可视为一个整体。5-羟色胺(5-HT)，一种 在中枢神经系统广泛分布的神经递质，主要参与情感、睡眠、疼痛、学 习记忆等复杂生理功能的调节。为了解5．羟色胺在海马中的分布特点， 本实验采用5．HT特异性抗体的方法，利用免疫组织化学技术，观察海马 进一步研究5．HT在海马学习、记忆的作用机制，提供形态学依据。 方法：1、实验动物和主要试剂：成年雄性SD大鼠8只(由大连医 科大学实验动物中心提供)、山羊超敏二步法免疫组化检测试剂、浓缩型 DAB(购自北京中杉金桥)。2、灌注固定：把大鼠经10％水合氯醛进行 腹腔麻醉。仰卧固定，用剪刀打开胸腔，将穿刺针经左心室插入升主动 脉，剪开右心耳，先用l50ml生理盐水快速冲洗后，给予4％多聚甲醛磷 酸缓冲液300ml灌注，持续灌注4小时后断头开颅取脑，放入相同固定 液中4℃过夜。在振动切片机连续冠状切片，片厚30urn，选取具有海马 的切片，置入0．0 学法：采用二步法进行免疫组织化学染色。4、统计学分析：在正置荧光 Raxinos，Charles 显微镜图像分析仪观察拍摄，核团定位参照George RatBraininstereotaxiccoordinates(大鼠脑立体 Watsonbian编著的The 定位图谱，第三版)。在低倍镜下观察海马和5．HT阳性神经元在海马中 CAl、CA2和CA3区的表达。在高倍镜下观察5．HT阳性神经纤维终末。 所得数据采用SPSSl6．5软件分析。 结果：在低倍光镜下观察：1、大鼠海马内5-HT免疫反应产物为棕黄 色(图1a)，可见大量的5．HT能阳性神经元和树突。阳性产物位于胞浆中， 细胞核透明，未见明显染色(图2a，3a，4a)2、免疫反应阳性产物在海马锥 体层细胞中分布最多，密集呈带。3、在20x10倍光镜下计数，CA2区免 疫反应阳性神经元数最多，其次是CAl区，CA3区最少。4、CA3的细 胞比其它区域略小，染色比CAl区弱。在高倍镜下：1、在海马CAl、 CA2和CA3中呈阳性反应的神经元胞体为圆形或卵圆形。2、海马内可 见免疫反应阳性、呈串珠状的5．HT能神经纤维终末(图2b，3b，4b)。免 疫反应对照切片为阴性(4×1O)，未见CAl、CA2和CA3区有5．HT免疫反 应阳性神经元及神经纤维终末表达。统计学结果：CAl、CA2和CA3区 经统计学分析CAl、CA2与CA3区阳性神经元数之间比较有统计学差异， CAlCA3，CA2CA3(P0．01)。 结论：1、大鼠海马内有5．HT能神经元和神经纤维终末表达。2、 5．HT免疫阳性产物在CAl、CA2与CA3区表达强度有差异，其阳性神 经元数CAlCA3，CA2CA3。 关键词： 5．羟色胺 海马 CAl、CA2和CA3表达 2 of in Expression 5-hydroxytryptamine andCA3of CAl，CA2 rats ’ ChuanAn Postgraduate：Yi Bin