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PB25 235
利用赝接触位移研究T4溶菌酶结构域取向
陈家良1,Haobo
Lian92,GotffriedOttin92,苏循成1’矿
f1.元素有机化学国家重点实验室,南开大学.天津300071)
of National
f2.ResearcSchool
Chemistry,AustralianUniversity,Canberra,ACT0200)
T4噬菌体的溶菌酶(T4L)由两个结构域组成,在蛋白行使功能过程中都参与了与底
物的结合。众多的晶体结构显示,T4L中两个结构域可以以紧凑(封闭构象)和分散(开放
构象)形式存在。1分子动力学模拟、电子顺磁共振、荧光共振能量转移以及残留偶极耦合
等方法的研究表明,T4L在溶液中存在多种不同构象,其平均构象接近一种比较开放的结构,
而这种开放的结构对于其结合底物和行使功能极其重要。本文中我们利用顺磁核磁共振并借
助于赝接触位移提供的结构信息,详细考察了T4L在溶液中的构象。
顺磁核磁共振技术,利用顺磁性不同的镧系金属离子产生的赝接触位移(pseudocontact
relaxation
enhancement,PRE)和残留偶极耦合
shifts,PCSs),顺磁弛豫增强(paramagnetic
(residualcouplings,RDC)效应为确定蛋白结构提供了长程的距离和取向信息。2在
dipolar
本工作中,我们通过定点突变在T4L中引入顺磁标签,用三种不同的镧系金属离子(rrb3+,
获得了T4L在溶液中的平均结构。与开放和封闭的晶体结构比较,溶液中T4L更倾向于开
放构象。顺磁标记技术为研究多结构域蛋白的域取向以及大分子复合物中蛋白与其他分子的
相对取向提供了~种更加简单有效的方式。
B
A
体结构(PDB:2LZM)(灰)和计算得到的平均结构(红)的重叠
Figure of NMR ofT4
1(A)SuperimpositionHSQC loadedwith Y3+
spectralysozymeS44C-tag Tm3+(black)and
of
(red).(B)Superimpositioncrystal calculated T4
structure(PDB:2LZM)(grey)andaveragestructure(red)of
lysozyme.
PB25
Domain
orientation
determinationofT4 basedon
lysozyme
shifts
pseudocontact
Jialiang(?henl,HaoboLiangz,GotOCried Sul≯
Ottingj,Xuncheng
(1.State
KeyLaboratory
ofElemento—organicChemistry,NankaiUniversity,Tian
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