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·109· 淋病奈瑟菌4种抗生素耐药遗传学研究 糜祖煌黄瑞萍郑亚芬 淋病奈瑟菌(淋菌)桩床分离株的青霉素、四环素、环丙沙 靶基因 引物序列(57—3’) 星耐药率逐年上升，仅太观霉素的耐药率仍在较低水平[I-3J。 (反向)CGA。GCC，G1fr．GAC．GAG。CAG，T 多年来，我国淋菌临床分离株耐药的遗传学背景研究侧重于 (反向)OGA．m．CTA．GCG，A订．CCG，AC 细菌的质粒谱分析【4，5J，而耐药相关基囚的直接研究较少甚 注：*表示并且为DNA涮序引物 至缺如。为深入了解淋苗临床分离株的生物学特性和指导临 3．优化后的PCR扩增体系：正向和反向引物各0．“ 床用药．我们对分离自常州地区的42株淋菌进行了与青霉索 ．5F衄o【几，dNlR各200t删．d／L，KCI10珥mol／L，(NH4) 耐药相关的B内酰胺酶TEM基因、青霉素结合蛋白2编码序 2s04．8mr∞l／L，MaCE 到阳1A基因、与四环素耐药相关的核糖体保护蛋白编码序 L，NP400．5％，TaqDNA聚合酶1U。全部反应体积204，其 列terM基因、与环丙沙星耐药相关的DNA回旋酶A亚单位 编码序列gyrA基因、与太观霉索耐药相关的168rRNA基因 等5种主要耐药基困检测与分析，现报告如下。 材料与方法 93℃3咿巧℃30F+72℃60s共35周期。 一、材料 42株淋菌均为2001年8月至2002年2月分离自常州地 上进行。 区游病患者病灶部。42株菌均经形态学检查、氧化酶试验、 结果 糖发酵试验和淋菌种特异cppB基因PCR检测证实。青霉 一、青霉素耐药状况：表型：耐药29株(69．O％)、中介13 素、四环素、环丙沙星和大观霉索敏感试验采用纸片扩散法， 株(31O％)，青霉素不敏感率100％。基因型：31株检出 并按美国临床实验室标准化委员会(NccLs)标准操作与判 读结果。 二、方法 1．研究策略：TEM基因、tetM基因为质粒介导基因，对 比均存在第345位氨基酸密码子CGA插入，而与他报道的青 临床分离株进行PCR检测，阳性表示已获得该基因。但鉴于 霉素耐药株序列(美国目立生物信息中心登录号分别为 TEM基因已有不同亚型，为探讨淋苗是否存在新型别。因此 X54021、X54022)完全相同。 率文对TEMPCR阳性产物再进行DNA序列测定；penn基 二、四环裹耐药状况：表型：耐药”株(64．3％)、中舟6 因、gyrA基因、165rRNA基因为染色体介导基因。基因突变 多数因点突变所致t故采用FCR扩增产物直接DNA序列测 基因型：22株检出tetlVI基因(524％)。 定。测得DNA序列与美国国立生物信息中心棱酸库(www． 三、环丙沙星耐药状况：表型：耐药39株(92．9％)、中介 nchi．nlm nih．gov／nuc[eotide)已登录的序列进行比对分析。 3株(71％)，环丙沙星不敏感率100