联合固氮菌生物被膜地研究.pdfVIP

第十六次全国环境微生物学学术研讨会会议论文集 联合固氮菌生物被膜的研究 王迪马旅雁幸 中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室 北京市朝阳区北辰西路1号院3号，100010 自然界中的微生物多以群体形式存在。微生物附着于载体表面，形成高度组织 更高的抵御外界压力和适应环境的能力。因此biofilm如同双刃剑一样对人们生活各个 方面有着有利或有弊的影响，例如病原微生物形成biofilm造成了耐药性增强、慢性感 染难以根治等难题：而对人类工农业生产有利的微生物可能通过形成biofilm获得更强 的环境适应能力和生产效率。因此，研究微生物biofilm的形成使其成为可受控状态将 对于人们的生产生活意义重大。生物固氮领域，联合固氮菌的固氮酶受到高铵和高氧 的抑制。自然环境大气中的氧浓度远超过固氮菌固氮酶表达所需的低浓度(1％氧分压 或更低)，环境中固氮微生物是如何在植物根际定植并在无氮源时抵御高氧发挥固氮 功能的呢?我们推测，联合固氮菌在自然环境中包括根际宿主表面同样可能以形成 stutzeri 形成与固氮酶体系之间是否存在联系。 施氏假单胞菌A1501分离自水稻根际，具有固氮能力。已有报道A1501菌株基因 组含有一个固氮岛，具有固氮酶合成和表达调控所需全部基因，推测该固氮岛是通过 基因水平转移获得。本实验首先建立了实验室条件下培养施氏假单胞菌A1501形成 biofilm。针对铵浓度对固氮菌的生长和固氮酶表达的影响，实验考察了不同铵浓度 下，A1501形成生物被膜的差异。结果表明A1501在无铵条件(即固氮条件)下形成 细胞。有趣的是，这种大胞囊只存在于无铵条件(即固氮条件)pellicle中，在低铵或 铵浓度的增加而减少。鉴于铵对固氮酶和biofilm的形成都有重要影响，我们试图考察 无铵条件下pellicle及其中大胞囊的形成是否与固氮需求相关。实验测定了无铵条件下 空气存在时(非低氧状态)A1501的游离细胞以及pellicle的固氮酶活。此条件下，液 体中的A1501游离细胞由于固氮酶受到高氧的抑制，无法检测出固氮酶活；而A1501 下biofilm(包括其中大胞囊)的形成可能发挥着屏蔽高氧的作用，为菌体细胞提供了 理想的低氧环境用来表达固氮酶活以供给细胞氮源生长。为进一步证实固氮酶表达与 32 第十六次全国环境微生物学学术研讨会会议论文集 其中，固氮酶结构蛋白NifH缺失突变株除了在高铵条件下与野生型A1501的biofilm 形成能力接近，在低铵条件下和无铵条件下bio矗lIII形成能力都很弱。固氮酶转录激活 以正常生长却无法形成biofilm的结果表明，NifA除了具有调控固氮酶表达的功能外， 还参与着A1501的biofilm的形成调节。 本研究提供了联合固氮菌施氏假单胞菌A1501形成生物被膜的条件，发现了其无 铵条件下pelliele中的细胞独特的组织形式，即数个小细胞包裹于一个大胞囊中。在本 组研究巴西固氮螺菌(Azospirillum 大胞囊的形成，说明这种由大胞囊组成的biofiim可能是联合固氮菌中普遍存在的现 象，推测与固氮需求相关。实验结果指示联合固氮菌的biofilm的形成同样受到铵的调 节，并与固氮酶系统有密切关联。本研究从biofilm角度考察固氮菌对环境的适应性， 为发挥和调控联合固氮菌的固氮能力提供了新的发展途径。 Effectsof onthe different abundanceand grazingmanagements structureofnitrifiersanddenitrifiersintheTibetan community meadowsoil alpine Zhen Xie