南极耐冷假单胞菌NJ197无机焦磷酸酯酶(PPase)基因地克隆研究.pdfVIP

南极耐冷假单胞菌NJl97无机焦磷酸酯酶(PPase) 基因的克隆研究 张金伟，曾润颖‘ 国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室，福建厦门361005 0592-8048218(移动) E-maihjinweizhang@21cn．corn电话：0592-2195323 底物． 在生物合成代谢过程中，各种可逆的核苷5、．三磷酸反应通过PPase催化水解 PPi产生Pi，就如在光合磷酸化作用、氧化磷酸化作用和糖酵解过程中产生ATP 一样．PPi作为原核生物和真核生物生命过程中许多反应的能源，同时能它能调控许 多酶反应，但没有真正参与其中的反应．PPi的作用基本上总是被抑制着的．然而有 研究表明，当PPi／Pi的比例大于ATP／ADP时就开始控制碳水化合物代谢过程中的 胞中的位置或总活力的反应中，PPi充当的是底物或调节子的角色．对PPase的不同 改变对生物总代谢有着广泛的影响．此外，最近研究发现PPase不仅对大分子化合 物的生物合成和生物体生长的调节有重要作用，而且在染色体复制等生物进化水 平上影响DNA分子的拷贝的正确性． I)是可溶性的无机焦磷酸酯酶(PPase)， PPase目前分为两大类，一类(Family II)是依耐于细胞膜的转旷无机焦磷酸酯酶(一．PPase)．而目前的研 另一类(Family II概括了 究显示，FamilyI归纳了目前已知的可溶性的无机焦磷酸酯酶；Family subtilis PPase，而这两族在 两株streptococcal和两株archeal和最近发现的Bacillus I的可溶性PPase又分为三个亚科，分 基因序列上并不存在任何的相似性，Family 别是原核的、植物的和动物或真菌的PPases．而在这些亚科之间，原核的和植物的 PPase基因序列较为相似．旷．PPase主要起到可逆Ⅳ泵作用，分子量比其它可溶性 PPase大，同时在基因序列上也不存在任何的相似性．所有已知的可溶性PPase都是 同源蛋白，他们在进化上具有很大的保守性．大肠杆菌和酿酒酵母PPase的定点突 变和高精度的X射线结晶学研究表明有17个氨基酸残基对酶的活性相当重要．并 I的可溶性PPase中，其中13个残基 且只有这17个残基存在于目前已知的Family 为重要的活性残基．在其活性氨基酸残基中，需要一个赖氨酸作为活性基团的一部 分或十分靠近活性基团．所有已知的可溶性PPase对二价金属离子具有很强依耐性， 用． 多种来源的PPase已经得到了详细的研究，而来自嗜冷假单胞菌PPase目前还 未见报道．本研究报道了从南极普利兹湾深海沉积物中筛选菌株NJl97 (Pseudomonas 图1)，在GeneBank注册号为：使用DNAMAN软件对全长ORF为53 lbp的IPPase 19631DA的PPase蛋白质．与Psychrobacter Neisseria Z249 meningitidis succiniciproducens 一步研究． 主要参考文献： 1．LahtiR．，KolakowskiL．F．Jr．，HeinonenJ．，Vihinen B．S． M．，PohjanoksaK．，Cooperman ConservationoffunctionalresiduesbetweenandE．coli