茯苓菌种质量标准和种质资源与研究.pdfVIP

中 文摘要 优良纯化的菌种，是茯苓栽培成功的根本保证，其直接影响茯苓的产 品质量和栽培产量，继而影响栽培者的经济效益b1 近年来对菌种的研究投入不足，出现了滞后于生产的局面。由于育种 工作的滞后，国内各地以相互引种替代新品种，在产品名称上，商业名称、 学名和俗名上的混淆和张冠李戴现象时有发生，同种异名现象较多，随意 起名编号更为普遍，如从异地引进的菌种，随意编号，以掩盖真实来源和 编号造成菌种混乱。因此，迫切需要一种操作性强、能准确鉴定食(药) 用菌菌种的新方法。 同时，加快建立包括蛋白质和DNA指纹在内的茯苓种质资源信息库具 有更加现实的意义． 本课题根据茯苓各级菌种的制备及生长条件来确定茯苓各级菌种的 质量标准。对茯苓菌株培养基的筛选确定茯苓最适宜生长的培养基。同时， 采用酯酶同工酶技术和ISSR分子标记技术，对我国茯苓栽培菌株及部分 野生菌株的种质特征和遗传多样性进行了分析．主要研究结果如下： 一、 茯苓菌种的质量标准和检验规程研究 通过拮抗实验表明：其中部分菌株之间表现出十分明显的拮抗现象， 例如麻城一一靖28、P。一一ACCC5 0864等，说明其遗传系统存在差异；同 时部分菌株间拮抗现象不明显，例如：P。一一靖28等，说明其遗传差异 较小，可能属同物异名． 观察茯苓菌丝生长来确定茯苓的生长速度及萌发定植能力：在PDA 培养基上，在适温(24℃±1℃)时，萌发定植时间为1—2d，长满试管 斜面的时间为5—8d．在松木屑77％，麦麸或米糠20％，糖2％，石膏1％组 成的培养基上，25—30C温度下，茵丝长满菌袋一般为15—30d． 二、 茯苓菌株培养基的筛选研究 对茯苓菌株培养基进行筛选，包括固体和液体培养基的比较，发现最 适合的固体培养基为普通培养基，液体培养基为麦芽糖培养基． 三、 茯苓菌株的酯酶同工酶研究 取不同来源的茯苓菌株30个作为供试菌株进行酯酶同工酶分析，共 检测到211条酯酶同工酶谱带，每个菌株所具有的酶带数为6一11条不等， 多数为6条。30个供试菌株共有14种酶谱类型，其中部分菌株谱带相同。 聚类分析表明：当遗传相似水平为80S时，供试的30个茯苓菌株可分为 0864、 八类。第一类：鄂1、福建006；第二类：麻城、zJ、同仁堂、z(Z)、5 0、1 O、大别山、9、1 PO、86、靖28、F6、A1 4、Y1；第三类：5．78；第四 0876、DB；第 类：茯苓28；第五类：L；第六类：YN、茯苓5号、w、s1、5 七类：GD、901、GZ；第八类：ZL．部分菌株相似系数为1，说明它们亲缘 关系近。 四、 I SSR分子标记在茯苓菌株遗传多样性研究中的应用 采用不同来源的3个茯苓菌株对30个ISSR引物进行筛选，选择扩增 稳定、多态性较好的10个引物用于ISSR分析。在筛选退火温度的基础上， 用10条引物对30个茯苓菌株进行ISSR指纹图谱分析，10个引物共扩增 1 出10条DIqA带，其中具有多态性带70条，占总带数的64％，平均每个 引物扩增出7条带．从聚类分析结果可以看出，在86％水平上30个供试 的菌株可以分为六个大类．第一类：Z(Z)、鄂1、麻城、GD、茯苓28、 同仁堂；第二类：ZJ、YN、50876、F6．、901、A10、DB、50864、S1；第 8 Y1、9、P0；第五类：10；第六类：14、5．7 关键词茯苓；质量标准；酯酶同工酶；ISSR ThePori astrai ns I i standardsand I asm quaty germpresearch Special andresourcesresearchand ity：Variety．quaIit