七叶亭抗LPS致肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO升高的探究.pdfVIP

王 森1 新1，索占伟2，穆 祥2，杜绍范3，韦旭斌1，谭建华4，张 (1．吉林大学农学部，吉林长春130062；2．北京农学院动物科学技术系； 3．沈阳农业大学；4．军科院十一所) 摘要： 为了探讨秦皮有效成分七叶亭的药理作用机制，通过体外培养大鼠肠黏膜微血 管内皮细胞，采用硝酸还原酶法研究了七叶亭对正常肠黏膜微血管内皮细胞以及LPS致伤的 肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响。结果显示，七叶亭不但能降低正常肠黏膜檄血管内 皮细胞NO的分泌水平。尤其能抑制内毒素引起的肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO水平的升 高，七叶亭对LPS引起的肠黏膜微血管内皮细胞损伤有拮抗作用。 关键词：微血管内皮细胞；肠黏膜；七叶亭；NO；内毒素 革兰氏阴性菌脂多糖(res)是引起动物以及 u／l注射用青霉素(华北 人类腹泻、休克、内毒素血症、系统性炎症反应综 氨酰胺(Sigma)、1×105 合征以及多系统器官功能衰竭的主要致病因子， 制药股份有限公司)、0．Ig／l注射用链霉素(华北 从而在细菌性疾病的发病机制中起十分重要的作 制药股份有限公司)。维持培养基：添加5％FBS， 用…。越来越多的研究证明，LPS作用的靶细胞 其它成份同完全培养基。鉴定试剂：兔抗人第Ⅷ 是内皮细胞呤’，LPS可导致内皮细胞结构和功能 异常，而引发一系列的病理过程。因此，抑制内毒 索对内皮细胞的损伤作用，为细菌性疾病的治疗 津中医药研究所。NO检测试剂盒：深圳晶美生 和新药的研发提供了新的思路和方法。内皮细胞 物工程公司。 广泛分布于机体的大血管和微血管内壁，但不同 1．2 大鼠肠黏膜微血管内皮细胞传代培养及鉴定 部位的内皮细胞在形态、基因、表型、功能上都存 选取本实验室所培养第五代肠黏膜微血管内 在很大的差异¨-。因此，在利用体外培养的微血 皮细胞”】，进行传代培养，平均接种于48孔培养 管内皮细胞研究不同组织器官的病理时，应该选 板内，其中2孔置清洗灭菌的盖玻片，静止培养。 用相应部位的微血管内皮细胞作为试验材料。秦 待细胞铺满盖玻片时，取出，进行第Ⅷ因子相关抗 皮作为治疗热痢的要药，主要归大肠经。因此，研 原免疫荧光染色。其它细胞定时计数，待细胞数 究其主要成分对肠黏膜微血管内皮细胞的影响， 量增至1．0×105时，选取40孔用于试验。 有助于进一步阐明其药理机制。已有的研究证 明，内毒素等致病因子作用于内皮细胞后可引起 1．3细胞分组及指标测定 NO分泌增加，可以此作为激活或损伤内皮细胞 将细胞分为3组，每组设10孔。按分组加入 的标志”1。本试验旨从肠黏膜微血管内皮细胞 0．5ml不同的培养液进行培养。对照组：细胞用 分泌NO的角度，探讨七叶亭在治疗肠道疾病方 维持培养液培养；LPS组：细胞用添加1mg／ml 面的药理作用机制。 LPS的维持培养液培养；七叶亭组：细胞用添加 1材料与方法 5mg／ml七叶亭的维持培养液培养；LPS+七叶亭 1．1 试剂 组：细胞用含I LPS的维持培养液培养1h