重症监护室临床和环境分离耐药革兰阴性杆菌的同源性研究.pdfVIP

中国医院协会第十四届全国医院感染管理学术年会 重症监护室临床与环境分离耐药革兰阴性杆菌 的同源性研究 中南大学湘雅医院感染控制中心， ≠}研究生现在湖南省株洲市一医院传染病科(410008，湖南长沙) 李丹撑吴安华术冯 丽 黄昕李宪李 洁 革兰阴性杆菌是医院感染病原菌的重要组成部分， 耐药革兰阴性杆菌在医院内的传播，尤其是在 重症监护室(ICU)耐药细菌常引起医院感染流行甚至爆发。了解耐药细菌在医院内的传播机制及耐药 细菌传播与环境和手卫生的关系，对于制定有效的感染预防和控制策略十分重要。本文从检测某医院 ICU I临床标本和医疗环境及医护人员手分离的耐药革兰阴性杆菌的同源性入手，分析耐药菌在ICU的传 播机制。现将结果报道如下。 l材料与方法 ICU的住院患者各种标本中连续分离(不包括重复)耐药革兰阴性杆菌，共58株。环境和手菌株：为 共22株。 1．2研究方法 1．2．1细菌分离与鉴定临床菌株采用天地人微生物鉴定系统进行鉴定，再结合《全国临床检验操 作规程》进行手工生化鉴定菌株到种。环境菌株按《全国临床检验操作规程》进行手工生化鉴定菌株到 种。 1．2．2纸片扩散法药敏试验采用琼脂纸片扩散法(K．B法)，按美国国家临床实验室标准化委员会 1．2．3细菌质粒指纹图谱分析和限制性内切酶图谱分析提取质粒DNA，琼脂糖浓度为0．8％，以 Lambda Hind 其分子量大小。质粒DNA限制性内切酶分析采用Eco赳和HindIII，仍以LambdaDNA 1II为标 准，1．O％琼脂糖凝胶电泳2小时，观察记录结果。 ERjC一1R：5 7．AAGTAAGTGACTGGGGTGAGCG．3’。反应体系为50uu l，其中10×PCR缓冲液5 1．5mM，dNTPs u l，MgCL2 0．2mM，引物50pmol，DNA模板3l，Taq酶2．0U。扩增条件：94℃预变 性4min，94℃变性1min，58℃退火l min。 1．5％琼脂糖电泳进行分析。DNA同源性判定标准：不管条带密度，凡条带数目和位置完全相同者为同 一型；相差一条者，密切相关；不满足上述条件者为不同基因型。 ·374- 基础研究及其它 2结果 2．1 临床及环境病原菌分离情况58株临床分离的革兰阴性杆菌包括肠杆菌科细菌33株(56．9％)， 株，主要来自ICU病人床头柜表面、病床床垫、呼吸机螺纹管口、排痰机把手、水龙头表面、处置室桌 面、湿化瓶、电脑键盘以及医师，护士和护工的手。 2．280株革兰阴性杆菌对11种抗生素的耐药率药敏结果显示，临床分离的革兰阴性细菌对临床常 用抗菌药物的总体耐药率最低的是亚胺培南；对头孢噻肟和头孢曲松、氨曲南、头孢他啶、环丙沙星、 庆大霉素高度耐药；对头孢吡肟、氨苄西林／舒巴坦、哌拉西林／他唑巴坦、阿米卡星中度耐药。环境和 医护人员手分离的菌株耐药性亦较高，除亚胺培南外，对多种抗菌药物有不同程度的耐药，但总体耐药 率低于临床株的耐药菌。 2．3细菌质粒指纹图谱及限制性内切酶图谱分析针对同时从环境和临床分离同类型的细菌包括肺 炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、乙酸钙不动杆菌等80株(临床58株，环境22株)细菌进 行质粒指纹图谱分析，其中经质粒分析有流行病学相关性的菌株再做限制性酶切分析。 Kb 3．7Kb、3．1Kb、2．5 Kb、 Kb 19．2Kb、7．0Kb、1．4 带59．7Kb、19．2Kb、2．5Kb3种质粒；D型2株(分离自神经内科ICU病人)，携带19．2Kb、7．0Kb2