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不同日龄山羊睾丸生殖干细胞分离效果研究 王菊花，曹鸿国‘，章孝荣，张运海，李运生 安徽农业大学动物科技学院：安徽地方畜禽遗传资源保护与生物育种省级实验室：安徽省羊繁育工程技术研究中心安徽合肥230036 关键词：山羊；精原干细胞；睾丸 摘要：试验探讨了不同年龄山羊睾丸组织精原干细胞的变化状况。流式细胞仪检测显示1月龄山羊睾丸内 精原干细胞数量最多。睾丸组织来源的细胞悬液分别经纯化培养后，也证实1月龄山羊睾丸来源的精原干 细胞数量最多。精原干细胞纯化后体外培养，流式细胞仪分析证实1月龄来源的山羊精原干细胞数量最多 且活性最强。 前言 山羊精原干细胞(SSCs)的分离是体外培养研究的起点，所分离得到的SSCs的数量的多少和其活性 强弱直接影响体外培养的成功及应用。一般认为从新生动物睾丸中获取SSCs纯度高于成年动物，对山羊睾 丸精原干细胞适宜分离幼龄山羊日龄，迄今未见详细报道，我们将设计不同日龄(初生、性成熟前和性成 熟后)山羊睾丸进行分离培养验证，以筛选合适日龄的供体山羊。 材料和方法 试验动物1月、3月、5月、2年不同日龄山羊。 试验方法 山羊睾丸组织切片；流式细胞仪鉴定纯化前后SSCs数和培养后SSCs数。 结果 结果表明，1月龄曲精细管管腔直径较小，管腔中细胞排列不紧密。3月龄曲精细管管腔直径增大，大 量精原细胞附于基膜上。当进一步生长发ffs户J时，雄性性原细胞开始分裂增殖。成年后，睾丸有不同阶 段的生精细胞。流式细胞仪鉴定纯化前不同年龄山羊SSCs占睾丸总细胞数分别为：0．93％、0．53％、 养9天后。各组生殖细胞数占睾丸体细胞的比率分别为：18．82％、10．63％、3．30％和1．41％。 讨论 通过以上研究表明，1月龄山羊睾丸获得SSCs数量最多，活性最好。体外短期培养后增殖效率最高，结 果证实了此前的研究结果。这是由于幼龄山羊睾丸中多数是未分化的细胞，所以SSCs占睾丸体细胞比例较 高。睾丸中包含的是且幼龄动物细胞活性往往要高于老龄动物。本研究通过体外培养后进一步证实1月龄 山羊睾丸生殖干细胞活性高于其他机组。所以SSCs体外培养过程中，睾丸供体选择幼龄山羊为宜。 致谢 国家自然科学基金，国家高科技项目 (2009ZX08008—007B)资助项目． 木通讯作者．caohonggu01@126．corn；zxr@ahau．edu．cn 128