生物化学 教学课件 作者 陆正清柯世怀 主编 实验.pptVIP

尚辅网 尚辅网 实验一 植物可溶性糖的测定 一、实验目的 加深对单糖、二糖、多糖化学性质的认识，进一步体会糖类化合物的分子结构与其化学性质的关系。 二、实验原理 糖是多羟基醛、多羟基酮或它们的缩合物。单糖及分子中含有半缩醛（酮）羟基的二糖都具有还原性，能将班氏试剂还原成砖红色的Cu2O沉淀。蔗糖等不含有半缩醛（酮）羟基的糖则无还原性。但蔗糖经水解生成了葡萄糖和果糖，因而水解液具有还原性。 多糖是由许多单糖缩合而成的高分子化合物，无还原性。但多糖在酸存在下加热水解，可生成单糖，随之具有还原性。淀粉为一多糖，经水解先生成糊精，再水解成麦芽糖，最终水解产物是葡萄糖，因此水解液也具有还原性，能与班氏试剂发生反应。淀粉遇碘显蓝色，此反应很灵敏，常用于检验淀粉或碘。 糖在浓酸存在下，可与酚类化合物产生颜色反应。糖在浓硫酸的作用下与α-萘酚反应显紫色，常用于糖类化合物的检出。己酮糖与间-苯二酚-盐酸试剂反应很快出现鲜红色，而己醛糖显色缓慢，两分钟后可出现微弱的红色，因此常用于区别酮糖（果糖）和醛糖（葡萄糖）。 三、实验仪器、试剂 试剂的配制 （1） 班氏试剂的配制：称取柠檬酸钠20g，无水碳酸钠11.5g，溶于100ml热水中，在不断搅拌下把含2g硫酸铜晶体的20ml水溶液慢慢加入。溶液应澄清，否则需过滤。 （2）2%淀粉溶液：将2g可溶性淀粉用10ml 蒸馏水调成糊状，加入 90ml沸水中煮沸后冷却。 （3）0.1%碘液：在1g碘和5g碘化钾中，加入尽可能少的蒸馏水使其溶解，然后用蒸馏水稀释为1000ml。 （4）α-萘酚试剂的配制：将10gα-萘酚溶于95%乙醇中，再用同样的乙醇稀释至100ml，贮于棕色瓶中，一般用前才配制。 （5）间-苯二酚-盐酸试剂的配制：将0.05g间-苯二酚溶于50ml浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100ml。 四、实验方法和步骤 （一）糖的还原性：取5支大试管，编号后各加入1ml班氏试剂，再分别加入2%葡萄糖、2%果糖、2%麦芽糖、2%蔗糖和2%淀粉溶液各10滴。振荡后，将试管用橡皮筋捆好放入沸水浴中，加热3～5分钟，观察那几个试管中生成砖红色沉淀。 （二） 蔗糖的水解：取2支大试管，各加入2%蔗糖溶液1ml，然后于一支试管中加入3mol·L H2SO42滴，将此支试管置于沸水浴中加热5～10分钟，冷却后，用10%Na2CO3中和，直到没有气泡发生为止。将两支试管各加入班氏试剂1ml，再在沸水浴中加热3～5分钟，观察并比较两管的结果。 （三）淀粉与碘的作用：取1支大试管加10滴2%淀粉溶液和1滴0.1%碘液，观察呈现的颜色。然后将此试管放入沸水浴中加热5～10分钟，观察有何现象。取出试管，放置冷却，又有何变化，为什么？ （四）淀粉的水解：取1支大试管，加2%淀粉溶液2ml ,再加入浓盐酸3滴，在沸水浴中加热10～15分钟，加热时每隔1～2分钟取出1滴反应液，置于白瓷滴板上，加1滴碘液，注意观察其颜色的变化过程，直到无蓝色出现为止。取出试管，冷却后，用10%Na2CO3中和，直到没有气泡发生为止，加入班氏试剂5～10滴，然后在沸水浴中加热3～5分钟，观察结果。 （五）糖的颜色反应 ⒈ α-萘酚反应：取4支小试管，分别加入2%葡萄糖、2%果糖、2%蔗糖和2%淀粉溶液1ml，然后各加入新配制的α-萘酚试剂2滴，混合均匀后，将试管倾斜沿管壁徐徐注入浓硫酸各1ml，切勿摇动。然后竖起试管，静置10分钟，观察两液界面之间出现紫色环。如无紫色环生成，可在水浴中温热后再进行观察。 ⒉ 间-苯二酚反应：取4支大试管，分别加入间-苯二酚-盐酸试剂1ml，然后在三支试管中各加入2%葡萄糖、2%果糖、2%蔗糖溶液5滴，第4支试管留作对照。将4支试管摇匀后，同时放入水浴中加热2分钟，观察各管出现颜色的顺序。 实验二 蛋白质微量凯氏定氮法 一、实验目的 掌握凯氏定氮法的原理、操作过程及计算方法，了解其实用意义。 二、实验原理 凯氏（Kyeldahl）定氮法是蛋白质含量测定的常用方法，它利用一般蛋白质含氮量较恒定，平均占16％左右，并且在一般生物组织中的氮主要存在于蛋白质中，因此测定生物组织中的含氮量可以计算出蛋白质的含量。 凯氏定氮法的定氮原理是将生物样品放在凯氏烧瓶中与硫酸共热进行消化，并加入硫酸钾以升高沸点，以硫酸铜作催化剂。样品中的C、H等元素全部氧化为CO2及水汽挥发掉，有机氮转变为氨并与硫酸结合生成硫酸銨，然后以标准硫酸銨溶液为对照，用茚三酮法测定其含氮量，最后计算出蛋白质的含量。 三、实验仪器、试剂 1．主要仪器：分光光度计、100ml凯氏烧瓶、25ml容量瓶、玻璃珠（3mm）、电炉等。 2．试剂的配制 ⑴ 硫酸钾与硫酸铜混合物（K2SO4∶CuSO4·5H2O＝3∶1）研