生物物质分离工程（ 第二版） 教学课件 作者 严希康 主编 第16章沉淀法.ppt

尚辅网 尚辅网 尚辅网 蛋白质的溶解特性 2 蛋白质胶体溶液的稳定性 3 概述 1 16 沉淀法 蛋白质沉淀方法 4 沉淀动力学 5 亲和沉淀 6 尚辅网 16.1 　概述 沉淀是一个广泛应用于生物产品（特别是蛋白质）下游加工过程的单元操作。它能够起到浓 缩与分离的双重作用，就广义而言，沉淀是一个溶质与溶剂之间关系可以交变的过程，通常用加 入试剂的办法，改变溶剂和溶质的能量平衡来降低其溶解度，使生物产物离开溶液生成不溶性颗 粒，沉降析出。 尚辅网 16.1 　概述 尚辅网 16.2 蛋白质的溶解特性 20多种氨基酸各自所呈现的疏水程度及其内部折叠是不相同的如苯丙氨酸被认为是最疏水的，而精氨酸则是最亲水的，因此蛋白质表面由不均匀分布的荷电基团所形成的荷区，亲水区和疏水区的分布和程度也不相同，从而决定了蛋白质在水相环境中的溶解程度。 尚辅网 16.2 蛋白质的溶解特性 尚辅网 16.2 蛋白质的溶解特性 尚辅网 16.3 蛋白质胶体溶液的稳定性 1 2 静电斥力 吸引力 尚辅网 16.3.1 静电斥力 通常认为蛋白质胶体表面带有负电荷，由于静电引力的作用使溶液中带相反电荷的粒子（即图16.3双电层的Stern模型和对应的电位正离子）被吸附在其周围，在界面上形成了双电层。 尚辅网 16.3.1 静电斥力 尚辅网 胶粒间存在着范德华引力，即Keeson引力（定向力或偶极力）、Debye引力（诱导力）和Lon-don引力（色散力）。这些范德华力及其产生的位能犞ａ随着颗粒间距离的增加而减小，详见吸附与离子交换一章。 16.3.2 吸引力 尚辅网 16.4 蛋白质沉淀方法 1 2 中性盐盐析法 等电点沉淀法 3 有机溶剂沉淀法 4 非离子型聚合物沉淀法 5 6 聚电解质沉淀法 金属离子沉淀法 尚辅网 16.4.1 中性盐盐析法 从前面的分析可知，在蛋白质溶液加入中性盐后会压缩双电层、降低ζ电位，即中性盐既会使蛋白质脱水，又会中和蛋白质所带的电荷，使颗粒间的相互排斥力失去，而在布朗运动的互相碰撞下，蛋白质分子结合成聚集物而沉淀析出，其机理可用图16.4表示。 尚辅网 16.4.1 中性盐盐析法 尚辅网 蛋白质的盐析行为常用Cohn经验式表示： ①在一定的pH值及温度条件下，改变盐的浓度（即离子强度）达到沉淀的目的，称为“Kｓ”分级盐析法。 ②在一定的离子强度下，改变溶液的pH值及温度，达到沉淀的目的，称为“β”分级盐析法。 16.4.1 中性盐盐析法 尚辅网 16.4.1 中性盐盐析法 尚辅网 16.4.1 中性盐盐析法 尚辅网 16.4.1 中性盐盐析法 尚辅网 16.4.1 中性盐盐析法 尚辅网 Melander与Horvath应用了Sinnanoglu有关蛋白质盐析时溶剂与溶质相互作用的理论，在对有盐存在时的蛋白质的溶解度特性作了进一步的研究，在他们所得到的模型中，认为溶质被溶剂形成的空腔所接纳，因此蛋白质盐析时的总能量应为溶质传递到溶液中去的能量，包括形成溶剂分子空腔的能量和溶质与溶剂之间静电相互作用的能量之和。 16.4.1 中性盐盐析法 尚辅网 在蛋白质盐析时，可以加入固体的盐，也可以加入盐的饱和溶液来改变蛋白质溶液的盐含量使其沉淀，其盐含量可以表示为饱和百分率，固体盐用量可按下式计算： 16.4.1 中性盐盐析法 尚辅网 蛋白质的离子化既与蛋白质的详细结构有关，也与溶液的pH值有关。一般来说，溶液的pH值高，蛋白质带负电，pH值低，蛋白质带正电，当溶液的pH值为某一值时，蛋白质几乎不带电，即净电荷为零，或者说它带相等的正电和负电，这时的pH值称为等电点，常用ｐI表示。对于不同的蛋白质它们的ｐI值是不同的，表16.3给出了若干种蛋白质和酶的等电点。 16.4.2 等电点沉淀法 尚辅网 16.4.2 等电点沉淀法 尚辅网 16.4.3 有机溶剂沉淀法 1. 不同有机溶剂沉淀蛋白质的效率受蛋白质种类、温度、ｐＨ值和杂质等因素影响，但大致上以丙酮为最佳，乙醇次之，甲醇更次，具体应通过试验加以选择。 2.在沉淀过程中应该控制好有关参数： ①温度 ②乙醇浓度 ③ｐＨ值 ④蛋白质浓度 尚辅网 16.4.4 非离子型聚合物沉淀法 1.非离子型聚合物最早在２０世纪６０年代时被用来沉淀分离血纤维蛋白原和免疫球蛋白，从此高相对分子质量非离子型聚合物沉淀蛋白质的方法被广泛使用。 2.加入非离子型聚合物沉淀蛋白质的计算公式与盐析法的计算公式相似： 尚辅网 16.4.4 非离子型聚合物沉淀法 使用ＰＥＧ沉淀分离蛋白质方法的优点是： ①体系的温