实验二血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定by陈蔚文.pptVIP

实验二 血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定 层 析 技 术 2. 依据：混合物中各组分的理化性质差异—吸附力、分子形状、大小、酸碱性或分子极性、分子亲和力以及分配系数。 固定相—固定不动流动相—对固定相作单向相对运动，推动样品中各组分通过固定相向前移动。各组分理化性质不同，对流动相和固定相具有不同的作用力，因此在流动相推动样品通过固定相的过程中，通过不断地吸附、解吸、吸附、解吸作用，造成混合物中各组分在固定相中的迁移距离不等，达到分离。 4．分类：①流动相的物理状态：气相和液相→ 气液/固，液固/液②方式：纸、薄层、柱③原理：吸附、分配、凝胶、离子交换、亲和、金属螯合、疏水、反相 5．凝胶层析(凝胶过滤、凝胶色谱、分子筛层析、分子排阻层析)①定义：指混合物随流动相流经固定相的层析柱时，混合物中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。 ②基本原理：固定相：凝胶，惰性三维空间多孔网状结构，故称分子筛，包括琼脂糖、交联葡聚糖、聚丙烯酰胺、琼脂糖-葡聚糖复合凝胶。流动相：洗脱液 凝胶层析的基本原理 共性：*生命高分子：透析、超滤、超离心、凝胶层析*蛋白质溶液是亲水胶体：稳定因素为水化膜和电荷→盐析/有机溶剂沉淀*两性电解质和等电点：pH pI，蛋白质带负电；反之带正电→电泳、离子交换层析 *有一定的功能：抗原性→ 免疫沉淀 个性：蛋白质的