实验五 鸡蛋清中卵类粘蛋白分离纯化及活性测定.docVIP

实验五 鸡蛋清中卵类粘蛋白分离纯化及活性测定 一、实验目的和要求 1） 设计从鸡蛋清中分离纯化卵类粘蛋白的试验方案。 2） 设计从鸡蛋清中分离纯化卵类粘蛋白的试验操作条件。 3） 了解离子交换层析系统中四大组成部分和实验主要影响因素。 4） 掌握熟离子交换层析层析仪的使用方法和注意事项。 5） 学会凝胶预处理和装柱、平衡、洗脱的方法。 二、器材和试剂 1．实验器材： 层析系统LH-2，（包括自动部分收集器，紫外检测仪，记录仪，蠕动泵，梯度混合器）6套；高速离心机；布氏漏斗；烧杯500ml,100ml，各16个；移液管1、2、5ml, 各16个；量筒50ml,100ml，各16个；真空干燥器 4个；滴管， 16个；滤纸φ120， 1盒； 2．实验试剂： (1)丙酮；(2)1％，pHl.15的三氯乙酸：将称取的三氯乙酸置烧杯内，加入2／3总体积的蒸馏水溶解，用6mol／L氯氧化钠调至约pHl.15，静置约1h，然后在pH计上校正至pH 1.15，最后补充水到所配体积；(3)0.02 mol／L,pH6.5，磷酸盐缓冲液；(4)0.5mol／L氯化钠—0.5mol／L氢氧化钠溶液；(5)0．5mol／L盐酸溶液；(6)0.3mol/L氯化钠—0.02mol／L磷酸盐缓冲液，pH6.5；(7)底物缓冲液：0.05mol／L，Tris-HCl缓冲液，pH8.0，内含2.22mol／L的氯化钙