生物工程091 制作：施水芳组员： 潘登 陈云龙 高冀 张翔.ppt

* 生物工程091 制作：施水芳 组员： 潘登 陈云龙 高冀 张翔 超抗原由White于1989年提出，是一类有细菌外毒素和逆转录病毒蛋白构成的抗原性物质，只需极低的浓度既能激活T细胞产生很强的免疫应答，对T淋巴细胞的激活能力是普通抗原的2000-50000倍。 什么是超抗原？ 超抗原是迄今为止发现能力最强的T细胞丝裂原，他对机体的免疫系统产生重要的影响，与许多疾病有着密切的关系 。 与T细胞结合的特征: 超抗原主要与CD4+T细胞结合;既能与TCRVβ链结合,也能与APC细胞上MHC-II类分子非多态区外侧结合,因此无MHC限制性。一种超抗原可活 化多数T细胞。 超抗原具有如下独特的特点: ①强大的刺激能力; ②无须抗原呈递细胞的处理; ③无MHC的限制; ④广泛的T细胞识别特性; ⑤选择性结合T细胞受体( T cellrecep ter, TCR)β链V区。 种类: 内源性超抗原（病毒性）:小鼠乳腺肿瘤病毒,是一种逆转录病毒,以前病毒形式整合于细胞中,这种小鼠可终生制造病毒 蛋白-即小鼠病毒性超抗原。 人类免疫缺陷病毒-人类的病毒性超抗原。 外源性超抗原（细菌外毒素）: 金黄色葡萄球菌肠毒素；链球菌产生的致热性外毒素。 以金葡菌肠毒素为例，它是由金黄色葡萄球菌分泌产生，是一种典型的超抗原。金葡菌肠毒素是目前已知的最强大的T细胞超抗原，纳克甚至皮克数量级浓度的金葡菌肠毒素分子在体内和体外均可以导致大量T细胞的增殖并促使其分泌产生多种细胞因子。 金葡菌肠毒素的上述特征提示其可以作为一种免疫调节制剂用于人肿瘤以及相关恶性疾病的免疫治疗。因此它也是现在研究较为透彻的超抗原。 金葡菌肠毒素基因检测以及重组金葡菌肠毒素的制备　　  可利用PCR方法对某企业提供的一株金葡素注射液生产菌株基因组中的肠毒素基因分布进行检测。而后将由PCR获得的多种编码金葡菌肠毒素的基因克隆至pGEX-4T-1质粒构建重组金葡菌肠毒素表达质粒。 而后利用大肠杆菌BL21表达带有GST标签的重组金葡菌肠毒素。利用亲和层析纯化带有GST标签的重组金葡菌肠毒素，用凝血酶将GST标签去除后利用阴离子层析对重组金葡菌肠毒素进行纯化。 重组金葡菌肠毒素的超抗原活性检测　　 利用MTT法对金葡菌肠毒素刺激小鼠淋巴细胞增殖的作用进行检测。通过增殖指数计算重组金葡菌肠毒素对小鼠淋巴细胞的刺激强度。 同样利用MTT法，以K562-ADM细胞作为靶细胞，对受重组金葡菌肠毒素刺激的小鼠淋巴细胞抑制肿瘤细胞生长的作用进行检测。 另外，以A549作为靶细胞，利用实时细胞电子分析系统对受重组SEI刺激的小鼠淋巴细胞抑制肿瘤细胞生长的作用进行检测 *