略论食用菌DNA分子标记技术的地位与前景.pdfVIP

首届全国食用菌中青年专家学术交流会 4．我田食用菌品种保护工作实麓简介 4．1机构：农业部植物新品种保护办公室、农业部科技发展中心。 4．2实旌保护的前提条件：有科学实用的改种的新品种DUS测试指南、已列入植物新品种保护名录、有相 当栽培量和经济价值。 4．3申请程序：申请一一初审一一审查一一测试一一公告一一领取品种权证书一一缴纳年费。根据《中华 人民共和国植物新品种保护条例》，按照《中华人民共和国植物新品种保护条例实施细则》规定的要求准 备材料申报材料，直接或者委托农业部植物新品种保护办公室指定的代理机构向其提出申请，申请包括请 求书、说明书、照片；同时交纳申请费。提交申请后，3个月内送交繁殖材料。按要求将菌种送至国家指 定机构；指定机构出具书面证明，20日内完成相关检测并将检测结果书面通知申请人和农业部植物新品种 保护办公室：检测不合格的，通知申请人1个月内重新送繁殖材料。指定机构对繁殖材料负有保密责任。 初审合格后交纳审查费，需要测试的要交纳测试费。 略论食用菌DNA分子标记技术的地位与前景 边银丙 (华中农业大学应用真菌研究所武汉430070) 摘要：正确分析和评价分于指纹标记技术在食用菌研究中的地位，不断拓展和深化食用菌分子标记指纹的研究，在当 前显得尤为必要。目前对食用菌菌株鉴别的DNA多态性研究较多，对菌株鉴定的分子指纹标记研究甚少；即使在研究种质资 源多态性方面，也常由于所用引物数量不够，使研究结果的可靠性和可信度大大降低{由于食用菌生活史中没有类似于植物 的二倍体营养体。常规遗传连锁分析方法不适应于食用菌，限制了应用分子标记构建各种食用菌遗传连锁。此外食用菌通常 形态特征不明显，可用于与分子标记进行遗传连锁分析的形态标记和生化标记等十分匮乏，不仅使优良质量性状或数量性状 难以标记，更使采用分子标记探讨克隆基因的研究收效甚微。尽管UPOV至今未将DNA指纹纳入植物新品种保护指南．但分 子指纹标记仍然是目前分子生物学研究中最常用的热门技术之一，不断完善分子标记技术是全世界同行共同的任务，而结合 食用菌的基本生物学特性开展分子指纹研究十分重要。 关键词：食用菌；分子标记；多态性；菌株鉴定；连锁分析；基因克隆 分子指纹标记与其它形态标记一样，主要用于反映物种个体问内在的差异性。由于大多数食用菌形态 特征不显著，开发大量有效的分子标记，对食用菌的种群鉴定和优良品种选育都具有十分重要的意义。但 由于分子标记技术种类较多，其操作原理，关键技术和实验条件各不相同，所揭示的生物学信息也存在差 异。国内对食用菌分子标记的研究报导较多，但受诸多因素的影响，研究水平参差不齐，对分子标记技术 存在着盲目崇拜滥用或盲目否定两种偏颇的态度。客观认识各种标记技术本身的优势和不足，正确评价分 子指纹技术在食用菌各个领域研究中的价值和作用，借鉴大田作物中的研究方法，深化和拓展分子指纹技 术在食用菌研究中应用的深度和广度，显得十分迫切和必要。 1．不同分子标记技术的优势和不足 1．IRAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA) 对基因组DNA进行PCR扩增而产生的多态性DNA片段。由于可以在没有任何分子生物学研究背景的情况下， 对某一物种进行指纹图谱的构建和遗传多样性的研究，相对于RFLP来说比较经济简便。RAPD反应受条件影 PCR反应的敏感度较高，易产生非特异性条带。设计正交反应，优化反应条件，调整Mr+浓度、退火温度、 构建，品种纯度的鉴别，具有自动化、快速、方便、直观等特点。另一方面，RAPD标记是显性分子标记， 不能识别杂合体和纯合体。RAPD技术不仅可用于种属特异性鉴定，确定进化关系，追踪外源导入基因．而且 可以鉴定染色体上特异的DNA片段，寻找与靶基因连锁的分子标记，用于基因分离、定位、遗传作图。 1．2RFLP(RestrictionLengthPolymorphism)RFLP是用特定的限制性内切酶切割不同个体的 Fragment 3 首届全国食用菌中青年专家学术交流会 DNA，产生大小不同的片段，通过与克隆的DNA片段(探针)杂交和放射自显影等步骤可以检测片段长度的多 态性，这样的酶与探针组合可以作为遗传标记。RFLP标记是一种共显性标记。在分离群体