实验三.母钟制作分离技术.pptVIP

实验三、食用菌母种制作分离技术 一、目的要求 1、明确食用菌无菌操作技术要点。 2、掌握食用 菌母钟分离技术。 二、基本原理：食用菌母钟分离方法较多，但主要采用组织和孢子分离，所不同的是前者取子实体某块组织，后者取子实体的孢子经过培养形成的纯菌丝体（纯种）。 三、实验准备 1.材料：空白斜面培养基(空白培养无菌).食用菌子实体等 2.器具：?酒精灯、接种环、火柴、尖头镊、酒精棉球、大镊子、接种箱、超净工作台、高锰酸钾 37％甲醛溶液、紫外灯、2%来苏水、标签纸等。 四、实验内容 1、?组织分离 2、??孢子分离 五、方法步骤 ?1.接种环境的处理?（1）接种箱的熏蒸??先用2%来苏清洁接种箱内外，放入接种所需的物品，用甲醛熏蒸。每立方米空间一般用甲醛10ml，加入高锰酸钾（5~7g）使甲醛氧化挥发。先将高锰酸钾放入接种箱内的容器中，再注入甲醛，立即产生强烈刺激的甲醛气体。熏蒸20--30min。 （2）超净工作台的消毒??用消毒液擦拭台面后放置接种所需物品，开启超净工作台上的紫外灯，照射20-30min后使用。 ? 接入的母种 2.组织分离法 ?此法是生产中最常用的方法，具有操作简便，菌丝萌发快，分离所得的菌种在培养基条件适宜的情况下，能保持原菌种的优良性状。 （1）种菇消毒??在接种箱内，用镊子夹着燃烧的酒精棉球迅速擦拭菇体。 （2）取接组织将菇体撕开，用无菌尖头镊在柄盖交界处取绿豆粒大组织，放入斜面培养基中央,迅速塞上棉塞。 ?3.多孢子分离 （1）钩悬法是一种特别适用于耳类，也适用于伞菌类的多孢分离法。???在接种箱内将一小块消毒的耳片或菇片悬挂于无菌三角瓶内（装约1cm厚的培养基），在25℃左右条件下，约24h现孢子粉时以无菌操作法取出分离材料。适温培养后挑取健壮尖端菌丝转管。 （2）孢子印分离法??取成熟子实体经表面消毒后，切去菌柄，将菌褶向下放置于灭过菌的有色纸上，在20～24℃静置一天，大量孢子落下形成孢子印，接种环沾少量孢子在试管或平板培养基上划线培养。 ?4.母种的培养 ?将斜面朝下斜置叠放于瓷盘中，放于培养箱中适温培养。2～3天后每天都要检查菌丝生长情况。及时挑拣污染试管（出现粘膜或杂色）。 ?5.注意事项：分离的母种一定纯化后再做出菇试验。?（1）纯化菌丝长至斜面1/2时，挑尖丝转管，培养成再生母种。?（2）出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种，使其出菇。看产量、质量、形态、长势、抗性如何，经 鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。?（3）控制菌龄菌丝 即将长满斜面（一般7～10天）终止培养。分别用于菌种保藏或繁衍原种。 六、作业 1、食用菌菌种分离技术有哪些方法？生产上最常用的是哪一种？ 2、.孢子分离的母种为何一定要做出菇试验？3.试设计一个分离野生平菇菌种的实验方案 * *