神经干细胞移植治疗192-IgG-saporin致老年性痴呆动物模型的实验的研究.pdf

神经干细胞移植治疗192·培G-s印om致老年性痴呆动物模型的实验研究 物模型的实验研究 硕士研究生： 罗秀梅 导 师： 龙大宏教授 摘要 le 老年性痴呆(senidementia，SD)，亦称阿尔茨海默病(Alzheimerdisease， ㈣是一种以进行性认知障碍和记忆能力损害为主的中枢神经系统(central nervous system，cNs)退行性疾病，并伴有不同程度的运动、认知、语言和人格 等多方面的异常。AD的发病率随着入口年龄的增大而增高。由于该病病程长， 致残率高，又缺乏有效的治疗方法，给家庭和社会带来沉重的经济和精神负担。 因此，寻找有效的AD治疗手段已成为当今医学界迫切的研究课题。 le AD的主要病理改变是皮质、海马等部位出现大量老年斑(seniplaques， SP)、神经元纤维缠结(neurofibrillarytangles，NFT)，同时大量神经元溃变 坏死，其中以基底前脑胆碱能神经元丢失最为严重。 AD研究进展缓慢的一个重要原因是目前尚没有一个能全面再现、模拟老年 性痴呆病理特征和行为学症状的模型。基底前脑胆碱能神经元退变是该病的显著 病理特征之一，对患者的行为认知缺陷起非常重要的作用。本课题采用选择性免 胆碱能神经元退变的病理改变和行为学症状，分析这些神经元的功能，寻找新的 AD治疗手段。 目前，AD的一些治疗方法只能缓解AD患者的部分症状，有些药物甚至会产 stem cells，NSCs)在发育和成年哺乳动 生严重的副作用。神经干细胞(neural 物CNS的存在并体外培养成功，尤其是神经干细胞系的建立，解决了脑细胞供体 不足的难繇，成为脑细胞移植的理想供体。NSCs的特性是：在体外自我复制， 稳定增殖；在宿主脑内可根据脑内微环境分化为特异性神经细胞，并与宿主脑组 织整合较好。 本实验研究内容主要包括：1．新生鼠海马NSCs的分离、培养与鉴定。2．侧 神经干细胞移植治疗IV·IgG·s印o^n致老年性痴呆动物模型的实验研究 移植治疗192一IgG-saporin致AD动物模型的疗效观察与评价。 实验部分 1材料和方法 LI神经干细胞(NSCs)的分离、纯化与鉴定 取新生sD大鼠(24h)的海马，机械分离，加入胰蛋白酶和DNA酶消化 分散，制成单细胞悬液，加入含2％翰、表皮生长因子(阱F)和碱性成纤维细胞 放置在37℃、5％c晚培养箱内培养。将原代培养约5-7d形成的细胞球离心，按 上述条件半量换液，吹打成单细胞悬液；以后每5-7d传代一次，方法同前。用 免疫细胞化学法，行抗Nestin染色，鉴定培养细胞的胚胎源性。 1．2老年性痴呆(AD)动物模型的制备 健康成年雄性SD大鼠38只，体重250～3009，(由广州医学院实验动物中心 提供)随机分为4组，正常(正常组)8只，单侧生理盐水注射组(损伤对照 型组)10只，基底前脑神经干细胞(NSCs)移植组(治疗组)12只。 SD大鼠用1％戊巴比妥钠(40mg／kg)行腹腔注射，动物麻醉后采用平头颅 5唧 位固定于立体定位仪上。以前囟为零点，在前囟后0．8哪，正中线左旁开L 处用7号针头把颅骨钻一孔，模型组和治疗组大鼠用10皿微量迸样器取5皿 192一IgG—saporin溶液(Advanced targetingsystems，0．5电／皿)，从该孔垂 直进针，针深至腹侧5．5唧，缓慢匀速推注，时间不少于5min，再留针3min。伤 口消毒，缝合皮肤。单独饲养。对照组按以上方法在左侧侧脑室注射5皿生理盐 水，正常组不进行任何手术。 I．3基底前脑NSCs移植 21天后，Y-迷宫检测各组大鼠的学习和记忆能力；检测后，治疗组大鼠行 标为：前囟前0．6珊、正