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生物质谱影像技术  中国农业大学 齐孟文  生物质谱影像技术，也称为生物影像质谱技术（biological mass spectrometry imaging  ， also known as biological imaging mass spectrometry ），是一种在质谱选通条件下，由对生物 样品表面分析物点电离所形成的离子质谱信号作为成像信号，用数字图像重建技术对生物样 品表面某种分子的空间分布进行可视化的一种分子成像技术。质谱影像技术主要包括，基质 辅助激光解吸电离质谱成像(MALDI imaging)、二次离子质谱成像(SIMS Imaging)及另一些质谱 成像，如解析电喷雾质谱成像(DESI imaging)等。  1. 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱成像  基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)成像，是用经光栅的激光按照对样 品划分的二维点阵模式照射生物样品与基质形成共结晶,基质将吸的收激光能量传递给生物 分子使其电离并气化,然后在电场作用下通过飞行管道,根据到达检测器的飞行时间不同而 被检测,测定离子的质荷比与离子的飞行时间成正比，成像软件系统同时采集样品点的空间 位置信息和所产生的离子质谱信号，然后经由质谱选通，以某种质谱离子强度作为成像信号， 对样品表面分子的空间分布进行数字图像重构一种分子影像方法。MALDI-TOF MS 可标记或 染色对组织存在的各类物资，如蛋白质和多肽、生物标志物、药物、代谢物直接进行二维成 像。由连续切片的2维断层影像，利用3维图像重构技术，也可以构建3维影像。其流程见下 图，关键步骤如下： 1．1切片制备 切片制备主要包括切片、融裱、 以及预处理3个基本环节，处理过程应保证切片的质量 稳定和形貌完好，避免分析物移位和降解，及切片打卷、起褶。切片一般采取冷冻切片方式 进行，厚度为10-20μm; 融裱是将切片转移黏贴到MALDI-MS的不锈钢靶盘上的过程，常用3 0 种方法，第一种方法是在将冰冻切片切后，用专门的工具刷将切片组织轻轻转移融裱到-15 C 预冷的靶盘上；第2 种方法是将靶盘放置在切片的上面, 在室温下直接黏附到靶上；第3种 方法是切片融裱在超薄玻璃片上，再用透明的双面胶带黏附到靶标上；预处理包括对切片冲 洗和原位消化。对蛋白质样品，组织切片中破裂的细胞和间隙液所释放的盐将抑制多肽/ 蛋 白质的离子化，清洗可去除盐的干扰。通常先用70%乙醇清洗以除去盐和组织碎片，再用90%～ 100%乙醇清洗使组织脱水并固定。于脂质含量较高的组织，常用有机溶剂(如氯仿、二甲苯) 清洗，以降低小分子量脂类的干扰。由于当前MALDI-MSI大分子质量的探测上限是20～30 kD, 分子质量更大的蛋白质需原位酶解成过多肽片段，由多肽可以实现对蛋白质的原位鉴定。 1.2基质覆盖 基质的选择与覆盖是MALDI- MSI 的关键。要求基质能与组织表面分子形成良好的共结 晶，能协助目标分子的高效电离。在对蛋白质等大分子成像时，常用Sinapinic acid (3 ,5-dimet hoxy-4-hydroxycinnami cacid , SA) 作为基质,在对多肽类小分子时，常用 α-cyano-4-hydroxycinnamic acid (CHCA) ,对药物小分子或外源性代谢小分子成像,也有研究 者选用2 , 5-dihydroxybenzoic acid (DHB) 等作为基质。此外，对基质溶液体系进行优化可以 改善结晶状况。基质喷涂技术的关键获得分布均匀和大小合适的基质结晶颗，用以提高质谱图像灵 敏度和分辨率。目前，基质喷涂方式包括：手动气喷雾，压电高频振动喷雾，声控微滴喷射和打印机 化学喷墨打印等。 1.2.1手动式气喷雾器 是最早使用一种简易喷射装置，与常用的喷雾器相似，利用气压将基质液滴喷射出来，能以气溶 胶大小的液滴覆盖在组织切片上。 1.2.2压电高频振动基质喷雾器 其操作原理是基质装在倒置的瓶中，瓶口与一带小孔的垂直薄片相接触，薄片上方与压电陶瓷 相连，喷雾时通过电压的变化调节薄片振动的频率和振幅，基质溶液水平喷出，雾滴在重力作用下自 由沉降在水