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转基因马铃薯作为生物反应器的研究 王萍 (淮海工学院海洋学院，江苏连云港222005) 摘要：本文概括介绍了植物生物反应器的优点以及研究概况，着重阐述了用转基因马铃 薯作为生物反应器生产疫苗和药用蛋白(多肽)等有重要经济价值的外源蛋白的研究进展。 关键词：马铃薯、转基因、生物反应器 反应体系。植物生物反应器是指把编码某种蛋白或酶的基因构建到合适的表达载体中，并 通过直接或间接的方法导人植物，使这些基因在植物中表达，通过提纯或直接以植物为原 料来生产某种特定物质的方法。 植物生物反应器研究工作最早是1988年比利时PGS公司将一种神经肽的编码基因转 入烟草，得到的转基因烟草表达出高产量的神经肽，意外地找到一条利用转基因植物生产 神经肽的途径。1989年美国斯格里普斯研究所利用转基因烟草高水平地表达了单克隆抗 将乙肝表面抗原(HbsAg)基因转人烟草中并得到表达，提取重组蛋白具有免疫原性。目 前，世界范围内已有100多种药用多肽和疫苗在植物中成功表达。植物生物反应器的研究 之所以得到了如此快速的发展，是由于植物作为生物反应器有以下优势： (1)植物细胞具有全能性，植物的组织、细胞或原生质体在适当的条件下都可以培养 发育成完整的植株，其组织培养基础好，遗传转化方法也趋于成熟； (2)植物细胞是真核细胞，在植物体内可对真核蛋白进行正确的翻译后加工，如糖基 化、酰胺化、磷酸化，精确地切割、折叠、装配，使表达产物具有与高等动物一致的生物 活性，形成有活性的分子； (3)植物是最经济的蛋白质生产系统，种植植物仅需要阳光、来自土壤或肥料的矿质 营养及水。所以，工厂化农业展现出的最诱人之处是它能廉价生产高价值的、供不应求的 蛋白； (4)植物是能够大规模生产蛋白质的生产系统，植物的适应能力强，对栽培(或培养) 条件的要求比动物和微生物宽松得多； (5)植物生产药用蛋白方法简单、方便、成本低； (6)将不同抗原基因的转基因植物进行杂交，可以很容易的获得多价转基因植物疫苗； (7)可避免繁杂的病毒接种程序和发酵产物的后加工过程； (8)转基因植物种子易于贮存，有利于抗原蛋白的生产和运输。 基金项目：吉林省自然科学基金4) 作者简介：王萍(1957一)，女，教授，从事植物遗传与基因工程研究。 一130— 目前用来作为植物生物反应器表达外源基因的植物材料主要有烟草、番茄、马铃薯、 香蕉、油菜、芜菁、莴苣、拟南芥等。相对于其它植物而言，以马铃薯作为生物反应器具 有许多优势。 马铃薯是世界上最主要的作物之一，因其具有粮菜兼用、生育期短、营养丰富等特 点，在农业生产和人民生活中均占有重要的地位。马铃薯以元性繁殖为主，转化基因可长 期稳定表达；以农杆菌介导方法转化马铃薯的技术成熟，遗传转化体系比较完善；转化周 期短，转化后，可以通过无性快繁获得转基因植株；马铃薯地上地下均可获得较大的生物 量；块茎便于贮藏和运输；有特异性的启动子；小鼠可以直接生食块茎，有利于动物免疫 试验等。由于这些特点使马铃薯己成为转基因模式植物，被认为是一个良好的生物反应 器，因此，备受科学工作者的青睐。转基因马铃薯在生产疫苗和药用蛋白(多肽)等有重 要经济价值的外源蛋白方面已取得了可喜的进展。 ● l 转基因马铃薯生产疫苗的研究 利用转基因植物生产疫苗是将抗原基因导入植物，使其在植物中表达，人或动物摄取 该植物或其中的抗原蛋白质后，就可产生对某抗原的免疫应答。由于注射疫苗通常难以触 发粘膜免疫应答，而用植物生产的食用疫苗可同时具有激活粘膜应答和全身应答的双重效 应，这将更益于帮助哺乳动物增强对许多危险微生物的防御。 植物反应器生产疫苗主要包括目的基因的获得；植物表达载体的构建，即将抗原基因 插入到植物表达载体(如pBIl21质粒)中；再通过直接法(基因枪法、电击法等)或载体法 (农杆菌介导法、脂质体介导法等)将含有目的基因的表达载体导人植物细胞，外源基因随 机整合人植物基因组中；选择转基因植物再生；表达水平的检测。它利用基因工程技术， 将病原微生物的抗原编码基因进行克隆重组，导入植物细胞生成转基因植物，其表达产物 不需要经过纯化，人或动物食用植物后，就可激发粘膜免疫，使机体产生特异性抗病能 力。 早在1990年Arntzen小组就开始进行用转基因植物生产口服疫苗的