猪肉中四种硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱串联质谱法(Cleanert PEP-2、Venusil MP C18色谱柱).docVIP

猪肉中四种硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱串联质谱法 一．实验目的 本文使用天津博纳艾杰尔科技有限公司的CleanertTM PEP-2固相萃取柱、VenusilTM MP C18色谱柱和AB SCIEX公司的API 4000+质谱仪，遵照中华人民共和国国家标准《猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定（GB/T 20752-2006）》提供的方法，检测猪肉中的4种硝基呋喃类代谢物残留。 二．实验方法 2.1.样品信息 呋喃代谢物 英文名 结构式 呋喃唑酮代谢物 3-amino--2-oxazolidinone（AOZ） 呋喃它酮代谢物 3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone （AMOZ） 呋喃妥因代谢物 1-aminohydantoin （AHD） 呋喃西林代谢物 semicarbazide （SEM） 2.2.样品提取 称取猪肉样品2g（精确到0.01g），置于50m棕色离心管中，加入15ml甲醇-水混合溶液（v:v 2：1），均质1min，8000r/min离心5min 吸取上清液倒掉，残渣中加入2ppb的硝基呋喃类代谢物混合标准品各1ml，混合均匀。 2.3.水解和衍生（注意避光） 向棕色离心管中加入20ml 0.2mol/l的盐酸溶液，涡旋1min使之混合均匀，之后加入0.3ml浓度为0.05mol/L的2-硝基苯甲醛，混匀，于37℃温水中避光衍生16小时。 2.4.净化处理 将衍生后的样品冷却至室温，加入5ml 0.1mol/l的磷酸氢二钾，并用1 mol/l的氢氧化钠溶液调PH约为7.4，混合均匀。之后用8000r/min离心10min,以小于2ml/min的流速过PEP-2小柱（规格为60mg/3ml，用5ml甲醇、5ml水活化），并用10ml的水洗涤固相萃取小柱，然后负压抽干柱子15min。用5ml乙酸乙酯洗脱于20ml棕色瓶中，并在40℃下氮气吹干。 用样品定容溶液（10ml乙腈，0.3ml的乙酸用水稀释至100ml）定容至1ml，充分溶解，并用0.2um滤膜过滤。 2.5.检测方法 色谱柱：? MP-C18（2.1×150mm?） 质谱仪：API 000+ 流动相：0.1%甲酸流速：0.2mL/min 进样体积：5μL 离子源：电喷雾（ESI），离子模式 扫描方式：多反应监测（MRM） Source/Gas Collision Gas CAD 6 Curtain Gas CUR 15 Ion Source Gas 1 GS 1 50 Ion Source Gas 2 GS 2 50 Ion Spray Voltage IS 5500 Temperature TEM 600 Interface Heater ihe On 表3 4种硝基呋喃待测物母离子和子离子参数表 物质名称 保留时间（min） 监测离子对 DP EP CE CXP 8.10 209.1/166.1 51 10 17 10 209.1/192.1 51 10 17 10 AHD 8.30 249.2/134.1 61 10 20 10 249.2/104.1 66 10 31 10 AOZ 8.89 236.2/134.1 61 10 20 10 236.2/104.1 56 10 31 10 AMOZ 3.12 335.3/291.2 46 10 19 10 335.5/128.1 46 10 19 10 图1 4种硝基呋喃代谢物总离子 图2 SEM（209/166）质谱图 图3 AOZ（236/134）质谱图 图4 AHD（249/134）质谱图 图5 AMOZ（335/291）质谱图 三．实验结果 0.5ppb猪肉基质加标回收实验结果： 表4 猪肉中0.5ppb加标回收实验结果 名称 1# 2# 3# 平均回收率 RSD AMOZ 109.43% 97.84% 109.75% 105.67% 6.42% SEM 91.81% 88.91% 88.22% 89.65% 2.12% AHD 80.68% 82.11% 77.25% 80.01% 3.12% AOZ 83.94% 80.70% 80.85% 81.83 0.02% 实验结论 Agela Cleanert? PEP-2、Agela Venusil? MP C18和AB SCIEX公司的API 4000+质谱仪用于猪肉中4种硝基呋喃代谢物的检测，性能良好，符合国标文件的要求。 订货信息 产品名称 规格/包装 订货号 定价（元） Cleanert? PEP-2 60mg/3mL，50支/包