第5章 植物细胞制药(二)课件.pptVIP

第五节 影响植物次级代谢产物累积的因素 在植物组织和细胞培养过程中，影响植物次级代谢产物产生和累积的因素主要有： ① 生物条件，如外植体、季节、休眠、分化等； ② 物理条件，如温度、光（光照时间、光强、光质）、通气（O2）、pH和渗透压等； ③ 化学条件，如无机盐（N、P、K等）、碳源、植物生长调节剂、维生素、氨基酸、核酸、抗生素、天然物质、前体等； ④ 工业培养条件，如培养罐类型、通气、搅拌和培养方法等。 一、外植物选择 不同外植体的悬浮细胞培养物，其最大次级代谢产物的累积时间各异。见图5-2，在生长曲线的不同时期，累积不同的产物。 同一化合物可以在不同外植体的不同生长阶段累积。 二、培养条件的影响 培养条件的影响可分为培养环境的同在因素和培养环境的外部因素等的影响。 1. 培养环境的内在影响 （1）接种和诱导 次级代谢产物的产率与外植体的大小、细胞密度及营养成分密切相关。 长春花外植体直径下1～12cm之间时才分泌蛇根碱的噻吩类成分 紫草细胞在培养的营养成分供给为1400mg/L时，细胞干重为2.8g/L，而营养成分提高到1900mg/L时，细胞干重则增加到4.9g/L 黄连的细胞中，细胞生长度提高一倍，其代谢产物小檗碱的含量降至50% 此外，外植体的前处理亦可严重影响次级代谢物的累积方式，如单冠毛菊悬浮细胞培养物暴露于蓝光中时才能合成花青苷。 （2）基本培养基组成 基本培养基的各种成分是愈伤组织和悬浮培养细胞生长的物质基础，尤其在稳定期次级代谢产物累积时更是如此。 ① P ： 低于基本培养基的含磷最常常导致次级代谢产物的累积，而缺乏磷又可导致生物量的大幅度降低。 ② N ： 氮源对细胞生长表现出很大差异；含氮化合物的数量和种类对次级代谢产物的合成有很大影响；氮尚可直接调节某些代谢过程。 ③Cu ： 重金属Cu元素是次级代谢产物累积的必要元素。在相对较高但又无毒的浓度下，铜还可作为一种非生物诱导子使用，此作用为一种应激效应，经过几次继代后效应消失。 （3）碳源 碳源（CO2、糖类）的性质和数量往往对培养细胞的生物量有很大的影响。 CO2可诱导出某些特征反应 异养培养中，使用最多的碳源是糖类，对次级代谢产物的影响主要取决于所使用的糖类的种类和浓度及其次级代谢产物的生物合成过程。 糖的作用可能为：①延长稳定期；②通过蔗糖的分解后产物所产生的对内源性生物素合成的抑制作用；③增强戊糖磷酸代途径有关酶的活性 （4）植物生长调节剂 植物生长调节剂的合适剂量及作用须根据植物材料和生理状态而定。 不同植物激素及其不同组合形式均可显著影响代谢产物的产生。 （5）O2和pH ① O2 培养细胞生长过程中需供氧，一般使用含5% CO2 洁净空气。 通气量应适当，过多或过少均影响细胞生长及次级代谢产物的合成。 ② pH 一般来说，最有利于培养细胞生长的pH在5～6之间。 在某些情况下，氢离子浓度可直接影响次级代谢产物的产生。 （6）渗出物 在细胞悬浮培养后期，培养液中常含有各种代谢产物，如某些初级代谢产物和次级代谢产物以及某些酸性物质、醇类和水解蛋白或活性蛋白等。 次级代谢产物的累积往往在水解酶活性增加之前进行。 2. 两步培养法 两步培养法（two-step culture或two-stage cultere）。第一步使用生长培养基，第二步采用生产培养基。前者是为了实现细胞的高生产度，后者通常具有较低含量的硝酸盐和磷酸盐，并含有较低的糖分或较少的碳源。 生产培养基有利于次级代谢产物的生产。 3. 培养环境的外部因素 （1）温度培养中次级代谢产物产生的最佳温度为20～28℃。当培养温度与培养物正常生长所要求的温度相差很大时，可引起某些应激效应以及对次级代谢产物产生的激活作用。温度的变化还可引起产物类型在质和量上的改变。 （2）搅拌频率植物培养细胞的产率与发酵罐的搅拌速度有关。 （3）培养容器的影响植物培养细胞次级代谢产物的产生可因为所用培养容器的大小和搅拌装置的不同而得到不同的结果。 （4）光的影响光照时间的长短、光质和光的强度对某些次级代谢产物的累积都有一定的影响。植物激素和光照具有协同作用或对抗作用。 第六节 植物细胞培养的生物反应器 植物与微生物相比差异显著：直径；纤维素；培养倍增时间和培养周期；呼吸率等 各类植物细胞的不同生理特征和代谢方式，以及不同的培养方式，要求有相应的植物细胞培养生物反应器设计思路。 用于细胞大规模生产的装置称为发酵罐；主要用于生产次级代谢产物的装置称为生物反应器（bioreactor）。 植物生物反应器 根据通气和搅拌系统的类型可将生物反应器分为以下几类： 摇瓶，通过机械的简单振摇达到拌目的。