酶工程 2.docVIP

酶的分类： 根据酶所催化的反应类型和机理：氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶、合成酶（2）根据酶的组成情况：单纯蛋白酶、结合蛋白酶 辅酶：与酶蛋白结合得比较松的小分子有机物 辅基：与酶蛋白结合得紧密的小分子有机物 活性部位：酶分子中直接与底物结合，并和酶催化作用直接有关的部位。包括：结合基团、催化基团 酶抑制作用： （1）可逆性抑制：竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制 不可逆性抑制： 酶活：在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物所需要的酶量。可以用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶单位来表示（U/g或U/ml）。 酶的生产方法：提取分离法、生物合成、化学合成 生长因子：是指某些微生物不能用普通的碳源、氮源物质进行合成，而必须另外加入少量的生长需求的有机物质。 功能：以辅酶与辅基的形式参与代谢中的酶促反应 酶诱导物：酶的作用底物 、酶的催化反应产物、作用底物的类似物 阻遏作用：（1）产物阻遏作用：是由酶催化作用的产物或者代谢途径的末端产物引起的阻遏作用。 （2）分解代谢物阻遏作用：是由分解代谢物（葡萄糖等和其它容易利用的碳源等物质经过分解代谢而产生的物质）引起的阻遏作用 提高酶产量的措施： 添加诱导物：在诱导酶的发酵过程中的某个适宜的时机，添加适宜的诱导物，可以显著提高酶的产量。 控制阻遏物的浓度：阻遏作用根据机理不同，可分为：产物阻遏和分解代谢物阻遏两种。控制阻遏物的浓度是解除阻遏、提高酶产量的有效措施 控制阻遏物浓度的方法：为了减少或者解除分解代谢物阻遏作用，应当控制培养基中葡萄糖等容易利用的碳源的浓度。对于受代谢途径末端产物阻遏的酶，可以通过控制末端产物的浓度的方法使阻遏解除。 (3)添加表面活性剂 (4):添加产酶促进剂 :产酶促进剂是指可以促进产酶、但是作用机理未阐明清楚的物质。产酶促进剂对不同细胞、不同酶的作用效果各不相同，现在还没有规律可循，要通过试验确定所添加的产酶促进剂的种类和浓度。 12.酶生物合成的模式 （1）同步合成型：酶的合成与细胞的生长同步进行。该类型酶的生物合成速度与细胞生长速度紧密联系，又称为生长偶联型。 特点：1）酶的生物合成可以诱导，不受分解代谢物阻遏和反应产物阻遏； 2）当除去诱导物或细胞进入平衡期后，酶的合成立即停止； 3）酶所对应的mRNA很不稳定。 延续合成型的特点：1）酶的合成可以诱导，不受分解代谢物或产物的阻遏；2）酶所对应的mRNA相当稳定，在生长平衡期后仍可继续较长时间用于酶的合成。 中期合成的特点：1）酶的合成受到反馈阻遏2）所对应的mRNA不稳定。 滞后期合成型的特点1）在对数生长期不合成酶（可能是受到分解代谢物阻遏的影响）；2）在对数生长期不合成酶（可能是受到分解代谢物阻遏的影响）； 选择最理想的酶合成模式——延续合成型； @：针对不同合成模式酶的调控措施： （1）对于同步合成型的酶，要尽量提高其对应的mRNA的稳定性，为此适当降低发酵温度是可取的措施； （2）对于滞后合成型的酶，要设法降低培养基中阻遏物的浓度 ，尽量减少甚至解除产物阻遏或分解代谢物阻遏作用，使酶的生物合成提早开始； （3）而对于中期合成型的酶，则要在提高mRNA的稳定性以及解除阻遏两方面下功夫，使其生物合成的开始时间提前， 并尽量延迟其生物合成停止的时间。 13.离心方法：常速、高速、超速 超速离心：差速离心法和密度梯度离心法 差速离心：从样品液中分离2种以上大小和密度不同的颗粒 差速离心：采用不同的离心速度和离心时间，使沉降速度不同的颗粒分批分离的方法；适用：分离大小和密度差异较大的颗粒 密度梯度离心 ：样品在密度梯度介质中进行离心，使沉降系数比较接近的组分得以分离的一种区带分离方法。 特点： 1）区带内的液相介质密度小于样品物质颗粒的密度。 2）适宜分离密度相近而大小不同的固相物质。 （3）等密度梯度离心：根据颗粒的密度不同而进行分离。 特点： 1)介质的密度梯度范围包括所有待分离物质的密度。 2)适于分离沉降系数相近，但密度不同的物质。 凝胶过滤层析与电泳 （1）凝胶过滤层析：是以各种多孔凝胶为固定相，利用溶液中各组分的分子量不同而进行分离的技术。 原理：大分子物质不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来； 小分子物质可自由出入凝胶孔，流程长而后流出层析柱。 电泳：指带电粒子在电场中向着与其所带电荷性质相反的电极方向移动的过程。电泳技术是根据各种带电粒子在电场中迁移速度的不同而对物质进行分离的实验技术。 原理：在一定pH条件下（用buffer），不同大小、形状及带电颗粒在电场中的移动速度不同（用迁移率表示），各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。 15.酶分子修饰：通过各种方法使酶