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酶生物传感器在农药残留检测中的应用 王梓物技术4班 摘要：农药残留是在农业生产中施用农药后一部分农药直接或间接残存于谷物、蔬菜、果品、畜产品水产品中以及土壤和水体中的现象。 农药包括杀虫剂、除草剂、生长调节剂、灭菌剂，是现代农业中的重要生产资料，防治重大病虫害，保障农业丰收，确保粮食供应方面有不可替代的作用。农药生产应用上具有高效、迅速防止病虫害，促进植物生长或按使植物按人们的意愿生长，除草剂除草高效、省时省力的特点。可以说它和优良的品种，其他先进的栽培技术一起创造了我们现在的粮食、果蔬的极大丰富，满足我们的食物及畜禽的饲料需求〔3〕。 1.2农药残留的形成及危害 鉴于这些优点农药深受农民的喜爱甚至依赖。我国目前对于农药的使用没有明确的规定，而随着农药的使用病虫害的抗逆性逐渐提高，农药的使用量越来越大农民环保意识薄弱，在农业生产中不注意药量控制及停药期。可随着农药的大面积施用以及管理不规范等因素的原因，农药残留问题越来越严重。而残留在农产品中的农药将会直接对人体造成伤害。如有机磷农药可以直接危害人体的神经中枢、呼吸系统、循环系统。农药在体内蓄积或在体内代谢后产生有害物质引发慢性疾病致畸致癌〔4〕，有报道称农药可引发心血管疾病，造成男性不育，儿童性早熟。农药进入生态环境中杀死有益生物，进入食物链后沿食物链蓄积。农药杀死大量的生物使部分物种的数量急剧下降导致生态失衡。目前我国使用最多的农药主要有有机磷类及氨基甲酸醋类农药〔5〕。 2.酶生物传感器 酶生物传感器的基本原理：当酶电极浸入被测溶液，待测底物进人酶层的内部并参与反应，大部分酶反应都会产生或消耗一种可被电极测定的物质，当反应达到稳态时，电活性物质的浓度可以通过电位或电流的变化反映〔6〕。酶生物传感器理论最早出现于1962年，由Clark提出的以氧为中继体的电催化原构造酶传感器的设想提出以后，1967年Updik和Hicks首次研制出以铂电极为基体的葡萄搪氧化酶电极，用于定量检测血清中葡萄糖含量〔7〕。 用于农药的酶生物检测器主要有基于酶抑制原理和基于酶水解原理两种。与传统的分析方法相比，生物传感器具有如下特点〔8〕（1）:检测样品一般不需要预处理，也不需另加其它试剂。样品中被测组分的分离和检测可以同时完成;可以实现连续在线监测，容易实现自动化测量;响应快，样品用量少，并且可反复多次使用;不要求样品的清晰度;此外，传感器连同测定仪的成本远低于大型分析仪器，便于推广普及。 2.1基于酶抑制原理的生物传感器 这种生物传感器主要是基于对胆碱醋酶的抑制作用，检测果蔬中有机磷类和氨基甲酸醋类农药，但抑制多为不可逆抑制，再生困难。目前，研究报道较多的是乙酞胆碱醋类。乙酞胆碱醋酶广泛存在于动物的组织和血液、昆虫组织和植物中。其主要功能是可快速将乙酞胆碱水解为胆碱和乙酸，保证胆碱能的有效传递〔9〕。有机磷类及氨基甲酸醋类农药可专一性的与乙酞胆碱醋酶结合，抑制该酶的活性，从而阻止乙酰胆碱的水解。当酶被抑制，氧化电流的大小能准确反应酶被抑制的程度，从而检测出农药残留的浓度。 早在20世纪50年代乙酞胆碱醋酶就已用于检测农药残留。如朱铃〔9〕Ca )等研制的胆碱氧化酶生物传感器，用来检测氨基甲酸酷类农药西维因，其线性范围为25- 801ug/ L，最低检测限为151ug/ L。张贤珍〔10〕等用固定化乙酞胆碱醋酶作识别元件制备的生物传感器检测敌百虫，敌百虫是一种有机磷类杀虫剂。经过研究发现，传感器的频率变化值与敌百虫的浓度呈线性相关，敌百虫的检出限可降至2 ng/ml，且检测时间较色谱法少。赵鹏林等以固定化丁酞胆碱醋酶为识别元件，以分光光度计为换能器，构建的流动注射型酶生物传感器，在以柠檬酸盐缓冲液为载液的条件下，在西维因的质量浓度范围为0.2-0.5 ug/ml范围内具有良好线性关系。张淑平〔11〕等以孔径0. 45 um的硝酸纤维膜为固定化载体，制备的乙酞胆碱醋酶传感器与国家标准法分别检测喷洒了相同量农药的果蔬样品中的农药残留，喷洒10. 0 mg/L的氨基甲酸醋类农药甲蔡威和10. 0 mg/L的有机磷农药甲胺磷。生物传感器法检测的结果分别是6. 56mg/L和7. 27mg/L，较GC法稍低，但检测时间仅需30min，较GC法的120min明显更具应用前景。魏福祥等利用乙酞胆碱醋酶生物传感器技术，以苹果、黄瓜为样品，采用标准加入法进行分析，测定蔬菜水果中有机磷农药残留。该方法对马拉硫磷和甲基对硫磷的检出限分别为4. 80 × 10-11、2. 93× 10-10mol/L。 2.1基于酶水解原理的生物传感器 生物传感器上常用的水解酶有:有机磷酸水解酶(OPH)、酸性磷酸水解酶(OPAA)和对硫磷酸水解酶(PH)。报道较多的是有机磷水解酶。有机磷酸水解酶(OPH)可以