苦参碱对肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞的影响_医学论文.docVIP

苦参碱对肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞的影响_医学论文 苦参碱对肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞的影响_医学论文 作者：皇甫超申，刘彬，耿旭，房娜，谷敬丽 【摘要】 目的: 研究不同浓度苦参碱对肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)增殖、体外杀瘤活性的影响. 方法: 将苦参碱分为0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 g/L 5个浓度组，分别加入含有IL的DMEM培养基，体外诱导扩增TIL,通过MTT法检测TIL增殖、体外杀瘤活性，采用流式细胞术测定T淋巴细胞亚群，研究苦参碱体外对肿瘤免疫功能的影响. 结果：苦参碱低浓度组（终浓度分别为0.1，0.2 g/L）对TIL作用不明显, 高浓度组（终浓度为0.8 g/L）能抑制TIL增殖和体外杀瘤活性(0.01)，中浓度组（终浓度分别为0.4, 0.6 g/L）能促进TIL增殖和体外杀瘤活性(0.01)，CD8+数量有所增加，CD4+/CD8+比值有所下降(0.01). 结论: 合理利用苦参碱可增强患者肿瘤免疫能力. 【关键词】 苦参碱淋巴细胞,肿瘤浸润癌，肝细胞 　　【Abstract】 AIM: To explore the effect of different concentrations of matrine on proliferation and activity of tumorL2. The effect of matrine on proliferation and activity of TIL in vitro was studied by MTT, and the Phenotype was detected by flow cytometry (FCM). RESULTS: The lower concentration of matrine (0.1, 0.2 g/L) had no effect on TIL. High concentration of matrine (0.8 g/L) had a remarkable inhibitory effect on proliferation and antitumor activity of TIL (0.01). The middle concentration of matrine (0.4, 0.6 g/L) enhanced the proliferation and antitumor activity of TIL in vitro (0.01). The percentage of CD8+ increased and the ratio of CD4+/CD8+ decreased (0.01). CONCLUSION: The reasonable use of matrine could enhance the patients specific antitumor immune function. 　　【Keywords】 matrine TIL hepatocellular carcinoma 　　0引言 　　苦参碱作为一种传统的中药成份，可抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和分化，调节肿瘤宿主免疫功能，目前已成为抗癌中药研究的一个热点. 但有关苦参碱对免疫功能的影响目前存在很多争议［1］. 且相关研究多以患者外周血单个核细胞、淋巴器官内淋巴细胞、血清淋巴因子为研究对象，未见有关苦参碱对宿主抗肿瘤细胞免疫的主力肿瘤浸润淋巴细胞（tumor）抗瘤活性及机制的研究报道. 为此，我们选择从肝癌患者新鲜肿瘤组织中分离的TIL为研究对象，探讨苦参碱对其抗瘤活性的影响及可能机制. 　　1对象和方法 　　1.1对象 　　肝癌患者13例（男10，女3），平均年龄45.6（37~58）岁. 手术切除的瘤体平均直径5.2 cm，病理学诊断均为原发性肝细胞肝癌. 苦参碱购自西安天琪植物化学有限公司，分子质量248.37，纯度大于98%，临用前用PBS配成工作浓度. IL刀豆蛋白A(ConA), DMEM培养液、MTT，Ⅱ型胶原酶(美国Sigma公司).胎牛血清（华美生物工程公司），淋巴细胞分离液(上海试剂二厂). 　　1.2方法 　　1.2.1肝癌细胞和TIL分离、表型鉴定无菌切取新鲜人肝癌标本，剪碎，1 g/L Ⅱ型胶原酶消化，过滤，制成细胞悬液，用淋巴细胞分离液，不连续密度梯度分离法分离出TIL和肝癌细胞. 瑞氏染色鉴定. 肝癌细胞常规培养. TIL(5×108个/L)加入含rhIL的培养液中，试验组加入苦参碱，分低浓度组（终浓度分别为0.1,0.2 g/L）中浓度组（终浓度分别为0.4, 0.6 g/L）高浓度组（终浓度为0.8 g/L），空白对照组不加苦参碱，只加等量的培养液，体