荧光定量PCR技术在临床肺结核防治中的应用_医学论文.docVIP

荧光定量PCR技术在临床肺结核防治中的应用_医学论文 荧光定量PCR技术在临床肺结核防治中的应用_医学论文 【摘要】 目的 建立荧光定量PCR检测结核分枝杆菌方法，评估其在肺结核的临床诊断和疗效评估中的应用价值。方法 针对结核分枝杆菌保守序列IS6110基因设计引物和探针，建立荧光定量PCR方法。分别以荧光定量PCR、集菌培养和染色镜检法检测疑似肺结核和确诊病人随访的痰标本，比较各方法在结核病诊断以及治疗效果评估中的作用。结果 荧光定量PCR的检测灵敏度为4 Copies/反应，远高于抗酸染色法和集菌培养法。荧光定量PCR法与集菌培养法和抗酸染色法对临床样本的检出率分别为64.29％、35.12％和12.5％。病人治疗效果的随访检测结果显示，结核分枝杆菌的数量呈持续减少的趋势。结论 荧光定量PCR方法具有快速、敏感和特异性高的特点，可以快速、及时获取病人服药后的治疗效果，为医生的后续督导治疗提供依据，具有重要的临床意义。 【关键词】 分枝杆菌 荧光定量PCR 基因诊断 疗效观察 【Abstract】 Objective To evaluate the prospect of real-time PCR in the clinical diagnosis and efficiency evaluation of treatment to lung tuberculosis. Method Real-time PCR was established to detect M. tuberculosis specific sequence of IS6110. The result was compared with acid-fast staining and cultivation. We used the real time PCR during clinical treatment to the patients who diagnosed as lung tuberculosis. Result Real-time PCR is more sensitive and positive rate (64.29%) was significantly higher than cultivation (35.12%) and acid-fast staining (12.5%). The copy of TB diminished obviously in the treatment follow-up. Conclusion The real-time PCR has high sensitivity and specificity in the detection of M. tuberculosis. The method could feedback the efficiency and provides sensible advice for treatment in time. 【Key words】 Mycobacterium tuberculosis Real-time PCR Gene diagnosis Efficiency evaluation of treatment 目前结核病仍是全球性的重大公共卫生问题之一。全球现有肺结核病人2000多万，其中95％在发展中国家，我国是22个结核病高负担国家之一，活动性肺结核患者居世界第二位，每年因结核病死亡的人数达到15万人，给国家和社会带来沉重负担，严重影响我国经济和社会的发展[1～3]。 结核分枝杆菌的实验室检测是结核病诊断和治疗转归确认的重要依据。提高实验室检测能力，促进早诊断、早治疗是有效控制结核病蔓延的必要措施。目前临床以集菌培养和染色镜检法为主要的实验室检测手段。大量研究表明，传统方法的检出率低、培养周期长，难以满足临床需要。荧光定量PCR是近年发展起来的一种重要的基因诊断技术，具有灵敏度高、特异性好、可定量、污染少、易于标准化等优点，得到了广泛的应用[4，5]。本研究建立了荧光定量PCR检测临床结核分枝杆菌的方法，并对荧光定量PCR在临床肺结核诊断和疗效评估中的应用进行了评价，现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 标本 1.1.1 疑似病人 采集2009～2010年5月到深圳市龙岗区慢性病医院诊断与治疗患者的痰液标本168份，其中男性115份，女性53份，年龄15～60岁。 1.1.2 确诊患者 选择临床确诊肺结核病人，有低热、乏力、食欲不振、咳嗽和少量咯血等典型肺结核表现，X线健康检查肺部有结核病灶，实验室检测结果为阳性。为确保样本采集的连贯性，在争取病人同意随访的同时，选择暂时在家休养的就近病人。跟踪随访采集深圳市