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葡萄胎组织MMPs与TIMPs表达及意义_医学论文 葡萄胎组织MMPs与TIMPs表达及意义_医学论文 【关键词】 基质金属蛋白酶类 基质金属蛋白酶组织物抑制物 葡萄胎 ［ABSTRACT］ObjectiveTo explore the expressions of MMPs and TIMPs in hydatidiform mole and their clinical significance.MethodsThe mRNA expressions of MMPs and TIMPs were detected by RTPCR in tissue of hydatidiform mole (n=35) including six malignant transformed mole and normal villi (n=18).ResultsThe ratios of MMP9/TIMP1 mRNA expressions were significantly higher in the malignant transformed mole than those in the nonmalignant one and normal villi（F=3.62,q=3.82,3.57,0.05）. The differences in expressions of MMPs and TIMPs were not significant in all cases (Pgt0.05). Positive correlation between MMP ［KEY WORDS］matrix metalloproteinases tissue inhibitor of matrixnetalloproteinases hydatidiform mole 葡萄胎属于良性肿瘤，但是它具有潜在恶变的性能，虽然长期备受学者们的关注，但目前为止仍无理想的预测恶变的方法。虽然血绒毛膜促性腺激素（HCG）可作为一种较敏感的标志物用于预测葡萄胎的恶变，但是它有一定的滞后性。而基质金属蛋白酶（MMPs）几乎可降解细胞外基质（ECM）中除多糖以外的所有成分,是调节ECM动态平衡的最重要的一大酶系。基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs) 能与相应的MMPs 酶原及其活化形式结合,从而抑制MMPs的活性及产生,阻止肿瘤发生恶变和转移，因此，TIMPs的调节失衡在肿瘤的侵袭及转移中可能起重要作用。本研究通过检测基质金属蛋白酶及其抑制物MMP、MMP、TIMP及TIMP在正常绒毛和葡萄胎组织中的表达水平，探讨它们与葡萄胎恶变间的关系，为临床治疗提供依据。 1 资料与方法 1.1 一般资料 35例葡萄胎病例均为2001年1月～2003年1月在青岛大学医学院附属医院住院病人，经病理检查诊断为葡萄胎，清宫前均未进行预防性化疗；病人年龄22～36岁，中位年龄28岁；平均孕周为12周；随访期间有6例恶变为侵蚀性葡萄胎，其诊断参照宋鸿钊[1]提出的侵蚀性葡萄胎的诊断标准，列为葡萄胎恶变组（A组），其余病人作为萄胎未恶变葡组（B组）。18例行人工流产健康妇女作为对照组，随访后未发生滋养细胞疾病或持续性血HCG升高；病人年龄23～36岁， 中位年龄28岁；平均孕周为12周。 1.2 方法 1.2.1 新鲜标本的收集与处理 所有标本均在清宫时收集，取宫腔小水泡组织约0.5 g，置于 1.5 mL DEPC处理EP管中，立即置-79 ℃冰箱中备用。 1.2.2 RT方法 所有引物均由上海生工生物有限公司合成，以GAPDH为内参照。组织样本匀浆破碎后，按照Trizol（Invitrogen公司）说明提取总RNA，用紫外分光光度计测定RNA样品于波长260和280 nm处的吸光度，以观察所提取RNA样品的纯度，并计算其含量；取1 g总RNA按照PromegaA3500逆转录试剂盒说明合成cDNA；取3 μL 逆转录产物，2.5 μL buffer,1.5 μL MgCl2,0.5 μL dNTP,上下游引物各1.25 μL，Taq酶0.2 μL，最后加入去离子水至25 μL。开始94 ℃变性5 min，然后94 ℃预变性30 s；MMP、MMP、TIMP及TIMP分别行54、57、53、57 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共30个循环；最后72 ℃延伸10 min，4 ℃保存；取5 μL PCR产物，1 μL上样缓冲液于20 g/L的琼脂糖凝胶中电泳60 min，在紫外线下凝胶成像。 1.2.3 表达结果判断标准 PCR产物半定量分析,用天能GIS凝胶图像分析系统扫描凝胶，进行吸光度扫描和测定灰度值。以GAPDH 作为内参照校正,