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蛹虫草菌丝体中腺苷提取工艺的优化_药学论文 蛹虫草菌丝体中腺苷提取工艺的优化_药学论文 作者：牛双 高翔 安金双 郭憬憬 滕利荣 逯家辉 【摘要】 　　目的利用单因素及响应面分析法优化蛹虫草菌丝体腺苷水提工艺。方法通过单因素实验选取实验因素与水平，在单因素实验的基础上，以水料比、提取温度、提取时间为响应因子，以腺苷得率为响应值，进行3因素3水平的响应面实验。结果蛹虫草菌丝体腺苷水提最佳工艺条件为：料水比1∶38，提取温度44℃，提取时间为2.3 h。在该最佳工艺条件下蛹虫草菌丝体腺苷得率可达1.44 mg/g，与理论计算值1.42 mg/g基本一致。结论经响应面法优化所得模型可较好地预测蛹虫草菌丝体腺苷的得率。 【关键词】 蛹虫草； 腺苷； 水浸提； 响应面分析法 　　Abstract：Objective One-factor tests and Response Surface Methodology (RSM) were applied to optimizing the water extraction conditions of Cordyceps militaris mycelium adenosine. MethodsExperiment factors and levels were first selected by one-factor tests. On the basis of this, the ratio of water to sample, extracting temperature, extracting time were chosen as the factors in RSM and each factor in the design was studied at three different levels. ResultsThe optimum extraction conditions were confirmed as follows：the ratio of sample to water 1: 38, extracting temperature 44℃, extracting time 2.3 h. In this study, the optimized extraction conditions produced theoretically extraction rate of 1.42 mg/g and in practice 1.44 mg/g. ConclusionThe good agreement between the predicted and experimental results verified the validity of the model and existence of an optimal point. 　　Key words：Cordyceps militaris； Adenosine； Water extraction； Response Surface Methodology 　　蛹虫草Cordyceps militaris(L.ex Fr.)Link又名北冬虫夏草、北虫草等［1］，与 冬虫夏草同属异种，是虫草属的模式种,属于子囊菌亚门虫草属，是其寄生在昆虫纲鳞翅目夜蛾科昆虫蛹体上所长出的子座与僵死蛹体的复合体。作为一种具有多种药理功能、抗癌活性的药用真菌蛹虫草［2～4］，随着人们逐渐发现和认识其滋补疗效和提高人体免疫功能的功效，它的开发利用备受关注。 　　腺苷是合成三磷酸腺苷(ATP) 的主要原料，ATP 已被广泛应用于治疗心脏功能不全、脑动脉硬化及肌肉萎缩等症。本实验室通过液体深层发酵获得蛹虫草菌丝体，并利用单因素和响应面法对蛹虫草菌丝体腺苷提取工艺条件进行优化，以提高其腺苷得率，为蛹虫草腺苷产业化生产奠定了一定的理论基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料、试剂与设备蛹虫草（CGMCC 5.0699），购于中国科学院微生物研究所。甲醇（色谱纯），葡萄糖，磷酸二氢钾，硫酸镁，维生素B1。磷酸氢二钠、磷酸二氢钠均为分析纯。全自动在位灭菌发酵系统，真空冻干机，德国Eppendorf 5810R型高速冷冻离心机，电热恒温水浴锅，漩涡混合仪，高效液相仪，电子天平等。 　　1.2 方法 　　1.2.1 菌丝体的预处理将液体深层发酵获得的蛹虫草菌丝体真空冷冻干燥，粉碎，过60目筛用于实验。 　　1.2.2 菌丝体腺苷的提取方法准确称取0.15 g经预处理后的菌丝体，加蒸馏水在恒温水浴锅内浸提一定的时间。8 000 r/ min，离心10 min，分离上清液用于腺苷含量测定。 　　1.2.3 腺苷含量的测定方法根据2005版《