血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠Smad信号通路分子的影响_药学论文.docVIP

血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠Smad信号通路分子的影响_药学论文 血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠Smad信号通路分子的影响_药学论文 作者：陆敏 周娟 陆海英 王飞 刘煜敏 张悦 【摘要】 目的探讨血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)所致大鼠肾间质纤维化的作用及机理。方法雄性SD大鼠34只随机分为4组：正常组（6只）、假手术组（6只）、模型组（11只）、血府逐瘀胶囊治疗组（11只），采用UUO法建立大鼠肾间质纤维化模型，造模次日予以血府逐瘀胶囊灌胃治疗，3周后检测血清肌酐和尿素氮含量，观察肾功能变化；取肾组织进行HE和六胺银染色(periodic acid-silver metheramine, PASM)，观察肾组织病理变化；采用Western blotting分别检测肾组织中磷酸化Smad2（phospho-Smad2，p-Smad2），Smad2，Smad4，Smad7蛋白表达水平，观察Smad信号通路分子表达水平的变化。结果与正常组和假手术组比较，模型组大鼠血肌酐和尿素氮含量显著上升；肾小管基底膜明显增厚，部分肾小管上皮细胞变性，肾小管扩张与萎缩并存，肾间质明显增宽，纤维组织增生，大量炎细胞浸润；p-Smad2和Smad2蛋白表达显著上调，Smad7蛋白表达显著下调(0.01)，而Smad4蛋白表达水平无明显差异。各项指标正常组与假手术组均无差异。血府逐瘀胶囊治疗后，大鼠血肌酐和尿素氮含量显著降低(0.05)，梗阻侧肾组织病理改变明显轻于模型组，p-Smad2和Smad2蛋白表达明显减少(0.05)，而Smad7表达没有明显改变。结论血府逐淤胶囊可通过抑制梗阻侧肾组织中Smad2蛋白的表达以及活化，减少Smad通路信号传导，从而改善梗阻性肾病模型大鼠的肾功能和肾间质纤维化程度。 【关键词】 血府逐瘀胶囊 肾间质纤维化 Smad通路信号分子 肾间质纤维化是各种原因所致的肾脏疾病发展至后期的共同表现，是导致终末期肾功能衰竭的主要原因之一。积极防治肾间质纤维化，对慢性肾脏疾病的转归具有重要意义。近年来的临床资料显示，血府逐瘀汤具有改善肾功能、防治肾纤维化发生、延缓肾功能衰竭的作用［1］，但其作用机制尚不明确。本实验应用血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻（UUO）所致肾间质纤维化大鼠进行干预，观察其疗效及作用机制，为血府逐瘀胶囊防治肾间质纤维化的临床应用提供理论依据。 1 材料与仪器 1.1 动物 雄性SD大鼠34只，SPF级，体重160～180 g，由中国科学院上海实验动物中心提供，合格证号：SCXK(沪)2002-0002。 1.2 药物 血府逐瘀胶囊，购自天津宏仁堂药业有限公司，主要成分为桃仁、红花、当归、川芎、地黄、赤芍、牛膝、柴胡、枳壳、桔梗、甘草，用时将胶囊内药粉用蒸馏水配制成0.24 g/ml的混悬液。 1.3 试剂 血清肌酐检测试剂盒、血清尿素氮检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)， BCA蛋白浓度测定试剂盒(美国Pierce公司)，兔抗大鼠磷酸化Smad2多克隆抗体（美国Chemicon公司），小鼠抗大鼠Smad2单克隆抗体（美国Cell Signaling公司），小鼠抗大鼠Smad4单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，小鼠抗大鼠Smad7单克隆抗体（美国Ramp;D公司），辣根过氧化物酶耦联的小鼠抗兔GAPDH单克隆抗体(上海康成化学生物技术公司)，辣根过氧化物酶耦联的第2抗体(晶美生物工程有限公司)，ECL化学发光试剂盒(美国Pierce Pierce公司)。 1.4 仪器纯水系统(美国Labconco)，低温离心机(德国Eppendorf公司)，聚丙烯酰胺凝胶电泳仪及电转移仪(美国Bio-Rad公司)，凝胶成像和图像分析仪(上海复日公司)。Centrifuge 5417R低温高速离心机（德国Eppendorf公司）。LeicaRM213切片机以及LeicaEG119自动包埋机（德国莱卡公司）。 2 方法 2.1 单侧输尿管梗阻动物模型的建立 大鼠腹腔注射3%戊巴比妥钠(2 ml/kg)麻醉，呈左侧卧位固定于手术板上，常规消毒，打开腹腔、腹膜，暴露并分离左侧输尿管，4～0缝合线在左输尿管上1/3处两次结扎，止血，抗感染，3～0缝合线连续缝合关闭腹腔，间断缝合皮肤。假手术组不结扎输尿管，其余操作过程均相同。正常组不做任何处理。 2.2 分组与给药 大鼠被随机分为正常组(n=6)、假手术组(n=6)、模型组(n=11)以及血府逐瘀胶囊治疗组(n=11)。治疗组于术后第2天以2.4 g/（kg·d）血府逐瘀药液灌胃，假手术组及模型组均以等量生理盐水灌胃，正常组正常饲养。实验期间动物自由进食饮水。治疗21 d后杀检，取材备