Cu2+与烟草多酚氧化酶相互作用研究.pdfVIP

维普资讯 无 机 化 学 学 报 Vo1．19，No．6 第 6期 CHINESEJOURNALOFINORGANICCHEMISTRY Jun．，2003 2003年 6月 Cu2+与烟草多酚氧化酶相互作用研究 肖厚荣 施春华 夏炳乐 盛 良全 张艳鸽 刘清亮 (中国科学技术大学化学系，合肥 230026) 本文通过酶活性测定，荧光光谱和紫外光谱研究了外加 Cuz与烟草多酚氧化酶 (简称 PPO)的相互作用 。结果表 明，微量铜 的加入 能增加酶 的活性，C【u 】／【PPO】为 0．20左右时酶活性最大，【Cu 】／【PPO】为 0．91时，Cu 开始表现 出对 PPO活性 的 抑制：Cu+对 PPO 内源荧光 的猝灭机制属于形成络合物所 引起的静态猝灭，猝灭常数 为 8．0375×10L ·otol；Cu 的加入 使 PPO蛋 白质分子构象发生变化，a一螺旋含量增加 ，多肽链及 Trp和 Tyr残基 的芳杂环进一步 向分子 内收缩，疏水基 团之 间的 疏水作用增强 。 关键词 铜 多酚氧化酶 荧光光谱 紫外光谱 分类号 O614．121 多酚氧化酶 (简称 PPO)是一类广泛存在于植物 象所决定 的，构象改变，则微环境 随之改变 ；微环境 体 内的含铜氧化还原酶 (EC1．10．3．1)。它们 的共 同 改变，则生色 团的紫外可见吸收光谱亦随之改变 。因 特征是通过分子氧催化酚类物质氧化成醌，随后发 此，只要测 出生色团紫外吸收光谱 的变化，就可 以了 生醌 的聚合而棕色化 。由于它与很多农产品及工业 解微环境 的变化，从而推断因金属离子扰动而引起 原料 的加工 、贮藏等密切相关，并影 响其品质和色 的蛋 白质分子在溶液中的构象变化。铜形成天然多 泽，因此，PPO很早就引起 了人们 的注意，并对它进 酚氧化酶活性 中心，研究外加 Cu 与 PPO的相互作 行深入细致的研究。多酚氧化酶不但在烟草 的整个 用，无论是从应用还是从理论角度。都具有一定的意 生长过程中担当着重要 的角色．而且影 响着烟 叶的 义 。本文综合运用酶活性测定 、荧光光谱 、紫外光谱， 颜色和香吃味，所 以对烟草多酚氧化酶 的研究有重 研究外源 Cu 与烟草多酚氧化酶 的相互作用 。 要 的应用前景。对酶分子进行激活与抑制研究，是 1 实验部分 人们开发利用酶蛋 白的基础工作．也是研究催化作 用机理 的重要手段 。荧光光谱法是研究生物大分 1．1 试剂与仪器 子，特别是蛋 白质与各种有机小分子 、金属离子和无 硫酸铜，三羟 甲基氨基 甲烷，盐酸，磷酸二氢钠， 机化合物相互作用的重要手段 。通过对荧光特征峰 磷酸氢二钠，氢氧化钠等均为分析纯；CM．Sephadex 及其在不同条件下的位移情况 、荧光偏振 、同步荧 (C50)，DEAE．Sephadex(A50)，Sephadex(G75)均购 自瑞 光 、能量转移效率 、荧光寿命 、荧光猝灭 、荧光增强等 典 Pharmacia公司；二次蒸馏水 ；M．850型荧光分光 的研究，可 以获得蛋 白质分子 中荧光生色基 团的种 光度计，ShimadzuUV．260型分光光度计，pHS．IOA 类 、结构和所处微环境及其分布情况 、蛋 白质分子构 数字酸度 ／离子计，微量注射器，Finnpipette可调式 象变化等有用信息，同时还可 以得到外源物质与生 移液器等；Z型系列层析柱 (上海锦华实验器械厂)，