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SELEX技术及其应用进展 原理简介 SELEX 技术( system at ic evo lu t ion of ligandsby exponen t ial en richm en t) 即指数式扩增配体的系统进化技术, 是90 年代初建立的一项筛选技术, 是一种研究核酸结构与功能的有效方法。 SELEX 技术的基本原理就是利用分子生物学技术，构建一个人工合成的单链随机寡核苷酸文库，单链核苷酸的随机序列长度通常为20~40 bp左右，库容量1014~1015 个单链寡核苷酸序列之间库中不同核苷酸分子有其独特一级序列，在溶液中可形成不同的空间结构, 具有足够的空间结构多样性，可供多种靶分子筛选出与其有高亲和力、高特异性结合的配基. 筛选过程是一个定向进化、成熟的过程。 在某一特定温度和缓冲液环境中，将随机寡核苷酸文库与附着在支持物上的靶分子相互作用，再收集与靶分子有一定结合力的寡核苷酸分子，将这些收集的分子经PCR(ssDNA 随机文库)或RT-PCR(ssRNA 随机文库)扩增，再以扩增的次级库为对象重复上述过程进行筛选，经数轮至几十轮，最后进行克隆测序并鉴定，即可筛选出与靶分子具有高亲和力和高特异性结合的寡核苷酸配 可将SELEX 技术筛选核酸适配子的过程概括为：(1)建立寡核苷酸文库(DNA 文库或RNA 文库)；(2)文库的筛选；(3)文库的扩增；(4)文库表征与效应评价. Selex技术的优势 与蛋白类抗体相比，核酸类抗体（配基）具有如下的优越性： 与蛋白类抗体相比，核酸类抗体（配基）具有如下的优越性： 在体外而非体内（动物、细胞）条件下筛选，特性可依要求改变； 筛选条件不同而结果（目的物）不同，动力学参数可依体外诊断 条件的要求而改变； 克服毒性抗原和免疫原性弱的抗原所受的限制； 在体外化学合成，可以保证时间、质量和数量； 特异性和亲和力不受组织或样品中非靶蛋白的干扰； 可以在合成时精确、定点、随意连接其他功能基团和分子，如巯基、氨基和荧光素、生物素、酶等。 比抗体的分子小，方便体内影像诊断和治疗。如接上硫代磷酸，可用于细胞内诊断和治疗； 变性与复性可逆且速度快，可反复使用、长期保存和室温运输  在SELEX技术创立不到10年的期间内，已经筛选出大量的配基并开展了应用于临床诊断的研究。凡是涉及抗体的诊断领域，几乎都可以用核酸配基代替。 抗病毒：在治疗艾滋病方面，抑制HIV-1 逆转录酶是治疗AIDS 的关键点之一. 现已运用SELEX 技术筛选到高效结合HIV-1 反转录酶的适配子。在肝炎治疗方面，我国学者利用SELEX技术筛选出了与丙型肝炎病毒NS3 螺旋酶特异结合的寡核苷酸适配子。 抗炎：与人的p-selectin/IgG[10]和L-selectin/IgG[11]融合蛋白特异结合筛选出的适配子都已证实具有抑制融合蛋白对嗜中性粒细胞的黏附作用，且在体外试验中能彻底阻断嗜中性粒细胞在激活的血小板表面滚动.已证明能够抑制制瘤素M(OSM)与受体结合的抗体具有改善慢性关节炎症状的作用. Rhodes 等分离出了抗OSM 的核酸适配子，其治疗效果还有待证实. 而与血小板激活的生长因子，嗜中性粒细胞弹力蛋白酶，人非胰腺分泌磷酸酶A2 特异结合筛选出的适配子都已经过动物模型证实有抗炎的效果。 抗肿瘤 ：在抗肿瘤方面， Santulli-Marotto[12]等筛选的细胞毒性T 淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的适配子在体外具有能抑制CTLA-4 的功能，促进小鼠体内肿瘤的衰老。 抗凝血素：Ruscone 等筛选得到特异识别并能够有效抑制凝血因子Ⅸ的活性适体. Liu 等筛选出了能与牛凝血酶结合的RNA 适体。 抑制血管增生：目前以分离鉴定出抗血管内皮生长因子(VEGF)的RNA 适配子pageptanib，它只与VEGF 165 及其同工型结合，抑制VEGF 结合到自身的两个磷酸激酶受体Flk-1/KDR 和Flt-1 上，使其失去活性，Pageptanib 钠盐是NX1838 的适配子，它作为治疗新生血管性老年性视网膜黄斑变性(AMD)药物的药物分子、先导分子或生物导弹来指导靶向治疗。 免疫疾病：通过SELEX 技术筛选出与系统性红斑狼疮体内自身抗体特异性结合的配体，能拮抗这些抗体对机体的免疫损伤作用. Kraus 等用SELEX 技术得到CD4 分子的适配子，它能有效抑制异源混合淋巴细胞反应，可有望应用于减轻或消除器官移植免疫排斥反应。 展望 SELEX 技术自问世以来，其技术本身发展也非常迅速，可