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土壤微生物分析方法 周丽霞 1. 土壤微生物生物量碳（氯仿熏蒸提取法） Jenkinson and Powlson （1976 ）比较了γ-射线、高压灭菌、干热灭菌、氯仿 熏蒸灭菌的效果，发现氯仿熏蒸灭菌处理可杀死 99 ％以上的土壤微生物，并且 未改变土壤的理化性质，且容易从土壤中除去。因此，现在多利用氯仿熏蒸法进 行土壤微生物生物量的测定。 （1 ）原理：土壤经氯仿熏蒸处理后土壤中的微生物被杀死，造成细胞破裂，使 细胞内容物释放到土壤中，导致土壤中可提取的碳增加。用盐溶液提取出由死后 的微生物体内渗透出来的有机碳，通过测定浸提液中的碳含量，可以计算土壤微 生物量碳。 （2 ）操作步骤： ① 预处理：一般不需要。如果担心土壤状况可能会影响分析结果（如土壤太 干，土壤中微生物生长不好等），可以将采集到的土壤调节其含水量达到 最大持水量的60 ％，在25℃预培养1 周。 ② 氯仿熏蒸处理 （在通风橱内进行）： 在低温下保存的土壤要先从冰箱中取出，待放置到室温时再进行分析。 称取20 g 过2mm 筛的新鲜土样置于50 ml 小烧杯中，放入真空干燥器内， 并在真空干燥器内放置一装有去乙醇氯仿的小烧杯，烧杯内可放置几片防爆沸的 干净小瓷片。同时放入一小烧杯稀氢氧化钠溶液以吸收熏蒸期间释放出来的 - 1 - CO2 ，还应放一装水的小烧杯（或在干燥器底部放一层湿滤纸）以保持湿度。用 少量凡士林密封干燥器，在真空泵与干燥器之间可以加一缓冲瓶以防止氯仿爆沸 或由于抽真空使干燥器内外压力变化而造成干燥器破裂等现象发生，然后用真空 泵抽气至干燥器内氯仿沸腾。关闭真空干燥器阀门，在25℃下暗处放置24 小时。 熏蒸完成后，打开干燥器阀门（此时应听到空气进入的声音，否则可能熏蒸 不彻底，要重新熏蒸），取出装水的小烧杯（或湿润的滤纸）、装有碱液和氯仿的 烧杯（氯仿可倒回瓶中重复使用），用真空泵反复抽真空，并打开干燥器以除去 土壤中残存的氯仿（止闻不到土壤中的氯仿气味）。 另称取等量土壤样品放入另一干燥器中，但不熏蒸，作为对照土壤。 ③ K SO 浸提 ： 2 4 熏蒸结束后，将土壤转移到100 ml 振荡瓶中，加入60ml （或土水比1:4 ） 0.5 M K SO 溶液，中速振荡60 分钟以使土壤完全振荡开，静置后用中速定量滤 2 4 纸过滤。对照样品除不经氯仿熏蒸处理外，其他操作同熏蒸处理。 ④ 测定分析 ：一般采用K Cr O 容量法或碳分析仪（TOC ）测定法。 2 2 7 K Cr O 容量法 ： 2 2 7 吸取10ml 上述土壤浸提液于150ml 消化管中，准确加入10ml 0.018 mol L-1 -1 K Cr O -12 mol L H SO 溶液 ，再加入2 ～3 片干净小瓷片（防爆沸），混匀后在 2 2 7 2 4 175℃煮沸10 分钟，冷却后转移至150ml 三角瓶中，用去离子水洗涤3 ～4 次消 化管使溶液体积约为70 ～80ml ，加入1 滴邻啡罗啉指示剂，用0.05 mol L-1 FeSO4 标准溶液滴定 ，溶液颜色由橙黄色变为蓝绿色，再变为棕红色即为滴定终点。 - 2 - TOC 法：用TOC 总有机碳分析仪测定土壤浸提液中的有机碳含量。 （3 ）结果计算 ： K Cr O 容量法 ： 2 2 7 12 -1 3 有机碳量(mg kg ) = 4×10 M （V -V ）f 0