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菌落计数__迅数科技创新技术 系列专题 菌落计数_创新技术(四) ：多菌种混杂情况的检测 （杭州迅数科技有限公司） 在菌落计数中，常常会碰到这样一种情况，即培养皿中生长着多种不同种类的菌落：有真菌、细菌、 霉菌、放线菌等等。不同种类的菌落，往往颜色不同、生长形态不同。尤其是霉菌和放线菌，其表面往往 呈碎颗粒状，碎颗粒的密度不一样，中间密度高从而颜色深、边上密度低从而颜色浅；另外其边缘往往呈 毛刺状或云雾状，面积则比一般菌落大许多。图1 显示了三个包含霉菌和其它菌混杂的培养皿。 图1 多菌种混杂生长的培养皿 这种多菌种混杂、尤其是存在霉菌和放线菌的情况，给自动化菌落计数带来困难。这是由于目前的自 动化菌落计数是建立在图像分割技术基础上，而图像分割主要依据目标物与背景之间的差异性来进行的， 比如两者的灰度差异、颜色差异、或边缘轮廓的突变性等等。 图2 显示了采用传统图像分割技术，对包含霉菌的多菌种混杂的培养皿的分割效果。其中，图2-a 是 培养皿原图、图2-b 是采用传统图像分割技术的分割结果、图2-c 是对分割后的颗粒进行颜色填充以方便 观察。不难看到：（1）由于霉菌表面呈碎颗粒状，导致图像分割将其分成一颗颗碎小颗粒。（2 ）霉菌表面 的颜色变化，其边缘呈乳白色云雾状，转换成灰度后与其它白色菌落接近；而中间成墨绿色，转换成灰度 后与背景的灰度相接近。这就导致传统的灰度分割技术必然把边缘部分当作菌落一类、而把中心部分当作 背景一类来处理。（3 ）霉菌边缘的云雾状或模糊性，导致没有明显的边缘梯度变化，从而无法采用边缘梯 度分割技术。 图2 传统图像分割技术对多菌种混杂情况的处理结果 基于水平集活动轮廓模型的图像分割技术，是目前国际上较为前沿的图像处理技术。该技术将水平集 菌落计数__迅数科技创新技术 系列专题 和活动轮廓模型结合起来，在极小化能量泛函的过程中，使活动轮廓不断逼近目标而实现对目标的分割。 这一特点尤其适合对霉菌的检测，事实上，杭州迅数科技公司历经多年研究，已成功应用水平集活动轮廓 模型解决霉菌放线菌等的检测，并取得理想效果（详见本公司网站文献 《菌落计数_创新技术 （1~3）》）。 但当霉菌放线菌与其它菌种混合在一起时，问题就变得更加复杂。这时，采用水平集活动轮廓模型往 往对一种菌落有效、而对另一种菌落效果不好。在调整模型参数或约束条件后，对另一种菌落有效了、而 对这种菌落的效果又不好了。事实上，上述培养皿所表现出来的，是一个多菌种、多目标、多特征的复杂 问题。采用单一的水平集活动轮廓模型，已经无法取得理想效果。针对多目标、多特征的分割问题，目前 国际上研究较多的主要有以下两种方法：（1）多相CV 模型、（2 ）多层水平集框架模型。 1、多相CV 模型 [1] 由Chan 和Vese 提出的一种多相水平集分割算法，即多相CV 模型 。该算法在确定目标种类数之后， 采用m 个水平集函数相互约束地分割，并且可以用m 个水平集函数表示2m 个不重叠区域，从而避免在区 域内部存在真空或者区域之间存在重叠现象。 多相CV 模型的能量泛函为： 2 F (c,)  (u c )  dxdy   H ( ) n  0 I I  i m 1i m 1I n 2 其中u 是原图像数据，c 是第I 个区域的平均灰度值，x