降钙素基因相关肽对培养心肌细胞作用的实验观察_医学论文.docVIP

降钙素基因相关肽对培养心肌细胞作用的实验观察_医学论文 降钙素基因相关肽对培养心肌细胞作用的实验观察_医学论文 【关键词】,降钙素基因相关肽 　　关键词:降钙素基因相关肽心肌细胞细胞毒性细胞培养 　　摘要:目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对心肌细胞的毒性作用.方法将原代培养成活4d后的大鼠心肌细胞分为4组，A组为对照组，B，C，D3组分别加入CGRP1×10-9，1×10-8和1×10-7mol#12539L-1.实验开始后0.5，1.0，1.5及2.0h评定心肌细胞搏动功能，观察细胞酶、培养液中电解质变化及形态学变化.结果B，C，D组各时点搏动频率均较A组各时点加快，D组在2.0h细胞呈部分或无搏动，随剂量递增及作用时间延长，细胞形态学略有变化，但不明显.乳酸脱氢酶，天冬氨酸转氨酶，肌酸激酶和α-羟丁酸脱氢酶释放量、电解质含量及CO2含量均未见显著改变.结论CGRP在低浓度（1×10-9，1×10-8mol#12539L-1）时呈正性变时、变力作用高浓度（大于1×10-7mol#12539L-1）时呈现一定的抑制作用. 　　Abstract:AIMToinvestigateCGRPcardiotoxicityprofile.METHODSFourday-oldspontaneouslycontractingneona-talprimarymyocardialcellculturesobtainedfrom2-to3-dayoldWistarratsweredividedinto4groups，groupAascontrolandgroupB，C，andDtreatedwithCGRP1×10-9，1×10-8and1×10-7mol#12539L-1respectivelyfrom0.5to2.0h.Thecontractility，morphology，cytoplasmicenzyme（LDH，AST，CKandHBD）releasecontentofmyocardialcell，theconcentrationofelectrolytes（K+，Na+，Ca2+andCl-）inthemediumandthecontentofCO2weremeasured0.5，1.0，1.5and2.0hfollowingCGRPadministration.RESULTSIngroupB，CandDthebeatingratesofmyocardialcellcul-turesincreasedcomparedwithgroupA.Thecellsshowedpartlybeatingornobeatingat2.0hingroupD，andthechangesonmorphologywereinaconcentrationandtime-de-pendentmanner，butwerenotsignificant.Cytoplasmicen-zyme（LDH，AST，CKandHBD）releasecontentofmyocar-dialcell，theconcentrationofelectrolytes（K+，Na+，Ca2+andCl-）andthecontentofCO2showednosignificantchanges.CONCLUSIONLowerconcentrationsofCGRP（1×10-9，1×10-8mol#12539L-1）havepositivechronotropicandin-otropiceffects，whilehighconcentrationsofCGRP（gt1×10-7mol#12539L-1）showsomeinhibitiveaction. 　　0引言 　　降钙素基因相关肽（calciumgene-relatedpep-tide，CGRP）是一种内源性生物活性多肽，对心血管系统的活动具有调节作用.我们用大鼠心肌细胞原代培养法进行体外研究，旨在探讨CGRP对心肌细胞的作用. 　　1材料和方法 　　1.1心肌细胞的制备与培养［1，2］取2～3日龄Wistar大鼠，雌雄不拘（由我校实验动物中心提供），无菌条件下摘取心室，用10g#12539L-1胰蛋白酶磷酸盐缓冲液（pH7.4）在磁力搅拌（40r#12539min-1）下分散细胞，10min后改用2g#12539L-1胰蛋白酶液重复2次，再用0.1g#12539L-1胶原酶磷酸盐缓冲液（pH7.4）消化4次，弃去前2次细胞悬液，后5次细胞悬液离心后弃去上清液，将沉淀物合并混悬于10mLDMEM培养基（Gibco，美国）中行细胞计数，以每孔1×106细胞密度接种于含100mL#12539L-1小牛