降钙素基因相关肽对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响_医学论文.docVIP

降钙素基因相关肽对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响_医学论文 降钙素基因相关肽对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响_医学论文 【摘要】 　　目的 探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对HaCaT 细胞增殖、凋亡的影响。方法 以不同浓度(10-7 ～10-4 mmol/L)CGRP作用于HaCaT 细胞，用MTT法检测其对细胞吸光度（A）及生长曲线的影响；流式细胞术分析其对细胞凋亡率的影响。结果 不同浓度CGRP组A值均较对照组升高（F=7.78，q=3.53～7.71，0.05）。CGRP浓度在10-7 ～10-5 mmol/L时HaCaT 细胞吸光度随浓度增加而升高,但差异无统计学意义（Pgt0.05），在10-4 mmol/L时A值较10-5 mmol/L时反而降低（q=4.18，0.05）。细胞凋亡率随CGRP浓度升高下降，与对照组比较，差异有显著性（χ2=85.75～374.24，0.01)。结论 CGRP可以促进HaCaT 细胞增殖，抑制其凋亡,且作用强度与浓度有关。 【关键词】 降钙素基因相关肽 HaCaT 细胞 银屑病 细胞凋亡 　　［ABSTRACT］ Objective To investigate the effect of calcitonin generelated peptide (CGRP) on the proliferation and apoptosis of HaCaT cells. Methods Absorbance (A) of HaCaT cell treated with CGRP in different doses (range:10-7-10-4 mmol/L) and cell growth curve was determined by MTT. Apoptosis rate was assessed with flow cytometry. Results Absorbance of HaCaT cell treated with CGRP increased significantly, compared with that of the control (F=7.78,q=3.53-7.71,0.05). The apoptosis rate of HaCaT cells treated with CGRP was significantly lower than that of the control (χ2=85.75-374.24,0.01). Conclusion CGRP can promote HaCaT cell proliferation and inhibit apoptosis effectively. The effect is related to the concentration of CGRP. 　　［KEY WORDS］ Calcitonin generelated peptide HaCaT cells Psoriasis Apoptosis 　　HaCaT细胞株是发生了自身转化的人类角质形成细胞永生细胞株，许多生物学特性都与正常人角质形成细胞相似。本文采用不同浓度的降钙素基因相关肽（CGRP）作用于HaCaT细胞,观察其对HaCaT 细胞增殖和凋亡的影响，推测其在机体内可能引起的变化，以探讨其在银屑病皮损形成过程中的作用。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 HaCaT细胞 由青岛大学医学院药理学教研室王春波教授馈赠。 　　1.1.2 主要试剂 CGRP及角质形成细胞无血清培养基（KC）、DMEM培养基、四甲基偶氮唑蓝（MTT）（Sigma公司），Annexin凋亡试剂盒（深圳晶美公司），碘化丙啶、胰蛋白酶（北京中昊时代生物科技公司），乙二胺四乙酸钠（EDTA，上海生工生物工程公司），二甲基亚砜（DMSO，天津市天河化学试剂厂）。 　　1.1.3 主要仪器、设备 酶联免疫检测仪 (Bio，流式细胞仪(Becton Dickinson USA)，LXJ型离心机（南京第一医疗器械厂），倒置显微镜(Olympus)，CO2孵育箱(Memmert USA)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 实验分组 用KC配制成CGRP浓度分别为10-7 、10-6、10-5、10-4 mmol/L的实验组和不加CGRP的对照组。 　　1.2.2 CGRP对细胞增殖和生长曲线影响的检测采用MTT法检测。将HaCaT细胞以每孔4×103的密度接种至96孔板，CO2培养箱内培养24 h后，吸弃培养液，各孔分别加入上述不同浓度的培养液200 μL,并设空白对照组。每天每组取3孔加入MTT溶液20 μL（5 g/L）