血浆循环核酸p53突变诊断原发性肝癌的价值_医学论文.docVIP

血浆循环核酸p53突变诊断原发性肝癌的价值_医学论文 血浆循环核酸p53突变诊断原发性肝癌的价值_医学论文 作者：汪海丹，斯晓明，吕韶敏，任军 【关键词】 癌 关键词: 癌，肝细胞基因p53突变核酸类血浆 摘 要:目的 研究肝脏良恶性疾病患者血浆循环核酸p53基因突变，探讨其突变检测诊断肝癌的可行性和价值. 方法 肝脏疾病患者61例，其中原发性肝癌36例，良性组为肝血管瘤、肝囊肿和乙型肝炎肝硬化患者共25例，提取血浆DNA，采用PCR扩增p53基因外显子5amp6，7和8（E5amp6，E7和E8），用变性高效液相色谱法（DHPLC）对产物进行突变筛选. 结果 肝恶性肿瘤患者36例血浆提取的DNA扩增出E5amp6，E7和E8例数分别为10，36和35，良性组对应为0，6和4例.DHPLC检测到4/36例E5amp6突变，12/36例E7突变，未检测到E8突变，良性组检测到2/25例E7突变. 结论 良恶性组间扩增阳性率有明显差异（0.05），p53基因突变与乙型肝炎感染有关，HBsAg+ 肝癌患者p53基因突变率明显高于HBsAg- 肝癌患者（0.05），循环核酸p53突变检测有望成为肝癌高危人群特别是乙型肝炎感染和携带者预警或早期诊断的参考指标. 　　Keywords:carcinoma，hepatocelluargenes，p53mutationnucleic acidsplasma 　　Abstract:AIM To detect p53gene mutation in plasma DNA from cases with hepatic diseases，to explore a new method　for tumor diagnosis or monitoring.METHODS 36hepato-cellular carcinoma（HCC）（20HBsAg+ ），21HBV hepatitis/cirrhosis and4other benign liver disease patients were en-rolled in the research.DNA was extracted from plasma by using Qiagen Blood Kit and the target DNA fragments（Exon5amp6，7and8）were amplified by PCR.The production was an-alyzed by denaturing high performance liquid chromatography（DHPLC）.RESULTS Ten of E5amp6，36of E7and35of E8were amplified from36HCC and0，6and4corresponding to25benign liver disease patients.16（12of E7，4of E5amp6）and2mutation（2of E7）were detected by DHPLC from HCC and hepatitis/cirrhosis respectively.Two HCC patients had2mutation，and12（including10HCC）of16mutation patients were HBsAg+ .CONCLUSION Plasma DNA can be amplified more frequently in HCC.Small target fragment（lt200bp）is more efficient，which may be caused by poor plas-ma DNA.DHPLC can be used to screen mutation in plasma DNA amplified fragements.p53gene mutation can be found in hepatitis/cirrhosis but more frequently in HBsAg+ HCC（0.05）. 　　0 引言 　　早在1977年就有研究发现恶性肿瘤患者血浆中DNA含量显著增高.近年国外一些研究证实，在乳腺癌、恶性黑色素瘤血浆DNA存在癌/抑癌基因突变、启动子甲基化和微卫星改变，并发现通过有效治疗，肿瘤负荷减轻后，其血浆DNA可减低，甚至消失.因此，血浆DNA对肿瘤的诊断、治疗和预后评估都可能有重要价值［1，2］ .目前认为，p53基因突变与大多数肿瘤发生密切相关，因此我们抽提肿瘤和良性疾病患者血浆DNA，通过PCR扩增p53基因突变频率较高的外显子5amp6