苦参碱靶向缓释纳米球的制备及影响因素考察_药学论文.docVIP

苦参碱靶向缓释纳米球的制备及影响因素考察_药学论文 苦参碱靶向缓释纳米球的制备及影响因素考察_药学论文 作者：陈纭，金涌，李俊，黄晓晖，王凤娟，苏峰 【摘要】 　　目的制备肝靶向缓释苦参碱纳米球，并对其形态，载药量，包封率及药物利用率等纳米球质量进行研究。方法采用乳化溶剂挥发法制备苦参碱-PLGA-纳米球，并用透射电镜观察其外观形态，利用高效液相色谱（HPLC）测定药物含量。结果制得肝靶向缓释苦参碱-PLGA-NS，其平均包封率为79.5%，平均载药量为1.75%，平均粒径为190.5 nm。结论制备苦参碱-PLGA-NS基本达到设计要求，该制剂有望成为一种新的药物靶向载体系统。 【关键词】 苦参碱 乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA） 纳米球 　　苦参碱（matrine）是从豆科槐属植物山豆根Sophora tonkinensis Gagnep分离提取的氧化苦参碱和极少量槐果碱的混合物，具有抗炎，抗病毒，促免疫机制和抗肿瘤等作用，近年来发现它对病毒性肝炎亦有明显治疗作用［1～3］。纳米给药系统在实现靶向和缓释给药，以及提高难溶性药物的生物利用度，降低药物毒副作用等方面具有良好的应用前景［4，5］。高分子材料乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)，因其优良的生物相容性和生物降解性，被广泛用作纳米球（nanosphere，NS）的载体材料，以其为载体的NS克服了纳米乳剂、纳米脂质体药物易泄露等缺点，成为国内外的研究热点之一，为一类新型的靶向给药载体［6］。 　　本实验以PLGA为载体，Pluronic F68为乳化剂，成功地制备了粒径大小适中的KU-PLGA-NS。此制剂经脉管给药后可显著聚集于肝脏并缓慢释药，这种由肝脏枯否氏（kupffer）细胞吞噬所致的被动靶向作用无疑有利于肝位病灶尤其是肝炎等的治疗［7，8］。 　　1 材料与仪器 　　1.1 仪器79-1型磁力搅拌器（金坛市杰瑞尔电器有限公司），AG285型电子天平（瑞典METTLER TOLEDO 公司），岛津高效液相色谱仪（包括LC-20AB泵，SPD-M20A紫外检测器及岛津Lcsolution色谱工作站），C18色谱拄（依利特），超速冷冻离心机，纳米粒径分析仪（英国Malrern仪器公司），JEOL型高分辨透射电镜（日本电子株式会社），0.45 μm微孔滤膜。 　　1.2 试剂苦参碱（陕西龙孚生物化工有限责任公司）,PLGA（LA/GA=75/25，MW=8 600，济南岱罡生物科技有限公司）,Pluronic F-68（西安罗森伯科技有限公司），1.5%（W/V）磷钨酸，甲醇（色谱纯），丙酮等其他试剂均为分析纯。 　　标准溶液的配制： 　　水相：0.5%pluronicF-68，称取Pluronic F-68 0.5g 溶于100 ml的纯化水中，备用。 　　油相：精密称取苦参碱19.7 mg；PLGA（75/25）83.5 mg溶于5ml丙酮中，备用。 　　流动相的配制：取70 ml甲醇加入30 ml水混匀，再加入0.772 g KH2PO4混匀，再加入30 μl三乙胺，备用。 　　2 方法 　　2.1 苦参碱-PLGA-NS胶体溶液的制备取3 ml已配好的油相，将其用注射器针头缓慢注入到以一定速度（以不起泡为宜）搅拌的100 ml Pluronic F-68 水相中，常温下磁力搅拌除尽丙酮，搅拌时间以3 h为宜。经0.45 μm微孔滤膜过滤即得苦参碱-PLGA-NS胶体溶液。低温避光保存。 　　2.2 形态及粒径观察取KU-PLGA-NS胶体溶液适量，少量纯化水稀释后用1.5%（W/V）磷钨酸负染色，滴于镀膜的电镜铜网上，晾干后，置于透射电镜下观察纳米球的外观形态并拍摄照片。 　　2．3 色谱条件［9］C18色谱拄（大连依利特）；流动相为甲醇-水-三乙胺（70∶30∶0.009）；检测波长：229 nm；流速：1.0 ml/min；进样量：20 μl。 　　2.4 包封率、载药量及利用率的测定精密吸取苦参碱-PLGA-NS胶体溶液500 μl超速冷冻离心（45 000 r·min-1）2 h，精密吸取上清液10 μl，HPLC法测定苦参碱含量。计算未包封苦参碱的量（M1），再精密吸取苦参碱-PLGA-NS胶体溶液500 μl，用一定体积的混合有机溶剂溶解苦参碱和PLGA，测得苦参碱的总量，计算胶体溶液中苦参碱的含量（M2），MPLGA为PLGA的投药量，按下式计算包封率，载药量和药物利用率。 　　包封率（%）=（M2-M1）/M2×100% 　　载药量（%）=（M2-M1）/MPLGA×100% 　　药物利用率（%）=M2/投药量×100% 　　3 结果 　　3.1 透射电镜观察纳米球呈类球形，分布较均匀，电镜下计数500个纳米球，得