青蒿琥酯抑制人结肠癌SW620细胞侵袭的研究_药学论文.docVIP

青蒿琥酯抑制人结肠癌SW620细胞侵袭的研究_药学论文 青蒿琥酯抑制人结肠癌SW620细胞侵袭的研究_药学论文 作者：范钰，张尤历，姚广涛，李仪奎 【摘要】 　　目的观察中药提取物青蒿琥酯（artemisunate，ART）对结肠癌细胞侵袭的作用，并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的青蒿琥酯处理结肠癌SW620细胞，以软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖，以Boyden小室模型方法检测癌细胞侵袭能力，以Western blot方法检测细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)蛋白变化。结果青蒿琥酯能有效地抑制结肠癌细胞SW620的恶性增殖和侵袭能力，且呈剂量依赖性（0.01）。青蒿琥酯能有效地抑制癌细胞ICAM-1基因蛋白表达，呈时间和浓度依赖性（0.01）。结论青蒿琥酯可明显抑制结肠癌SW620细胞侵袭，其机制可能与下调ICAM-1蛋白水平有关。 【关键词】 青蒿琥酯； 结肠肿瘤； 锚着不依赖性增殖； 细胞间黏附分子 　　Abstract：ObjectiveTo study the effects and mechanism of Artemisunate on human colon cancer.MethodsAfter colon cancer SW620 cells were treated with different doses of Artemisunate, the growth of anchorage independence of cancer cells was studied in soft agar colony formation,and invasion ability was determined by Boyden chamber,and the protein level of intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) was detected by Western blot assay. ResultsArtemisunate could significantly inhibit both invasion ability and anchorage independence growth in a dose-dependent manner. The level of protein of ICAM-1 was down-regulated as compared with control group.ConclusionArtemisunate can inhibit invasion of colon carcinoma cell line SW620 through down-regulating ICAM-1 expression. 　　Key words：Artemisunate； Colon carcinoma； Anchorage independence growth； Intercellular adhesion molecule-1 　　青蒿琥酯（artemisunate，ART）是中药青蒿提取物的衍生物，研究发现，ART具有重要的抗肿瘤作用［1］，但在胃肠道肿瘤细胞研究极少。细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)是体内重要的免疫活性分子，与肿瘤侵袭转移具有密切的关系［2，3］。为此，本研究采用ART处理结肠癌SW620细胞，观察了ART对结肠癌细胞锚着不依赖性增殖、侵袭和ICAM-1蛋白表达的影响，以探讨其抗癌机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　青蒿琥酯，广西桂林第二制药厂产品，用0.5%NaHCO3溶解后再用生理盐水配置成所需浓度。RPMI1640、新生小牛血清，购自GIBCO公司。人结肠癌细胞株SW620，浙江大学肿瘤研究所冻存。ICAM-1单克隆抗体购自Santa Cruz公司。 　　1.2 细胞培养 　　人结肠癌SW620细胞在含15%新生小牛血清的RPMI1640液中培养，置37℃，50 ml/L CO2培养箱中。每日观察，待细胞至对数生长期，采用不同浓度的青蒿琥酯处理后，然后准备进行以下实验。 　　1.3 软琼脂集落培养实验 　　1.3.1 制备细胞悬液 　　将处理组及对照组细胞用含0.01%EDTA的0.25%胰酶消化，制备单细胞悬液，调整细胞浓度为2×103 细胞/ml，置室温备用。 　　1.3.2 制备底层琼脂 　　将1%的琼脂凝胶于微波炉完全溶化后放置45℃水浴中，温度平衡后与等体积45℃预温的汉20%新生小牛血清的RPMI 1640培养液混匀，加