青蒿琥酯诱导HL60细胞凋亡的研究_药学论文.docVIP

青蒿琥酯诱导HL细胞凋亡的研究_药学论文 青蒿琥酯诱导HL细胞凋亡的研究_药学论文 作者：刘俊玲，虞荣喜，陈均法【摘要】 　　本研究旨在研究青蒿琥酯体外诱导HL细胞凋亡及其过程中Bcl与ICAD蛋白表达的变化。采用MTT法测定青蒿琥酯对HL细胞的生长抑制作用；用光学显微镜检、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察和检测青蒿琥酯诱导HL细胞的凋亡；应用蛋白印迹法检测青蒿琥酯诱导HL细胞凋亡过程中Bcl与ICAD的表达变化情况。结果表明：青蒿琥酯对HL细胞有明显的生长抑制作用，并呈时间、剂量依赖性。48小时IC50值为18.33 μg/ml，其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关；Bcl和ICAD在HL细胞中均有表达，且随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：青蒿琥酯可诱导HL细胞凋亡，Bcl和ICAD在青蒿琥酯诱导HL细胞凋亡的信号传导途径中可能是重要的调控因子。 【关键词】 青蒿琥酯　HL细胞系　细胞凋亡 　　Apoptosis of HL Abstract The study was aimed to investigate the effect of artesunate (ART) on the apoptosis of HL60 cells in vitro and the expression of Bcl2 and ICAD in the process of apoptosis induced by ART. The inhibition of ART on HL60 cells were evaluated by means of MTT assay; cell apoptosis was detected by light microscopy, agarose gel electrophoresis, flow cytometry; Western blot was used to analyze the expression of Bcl2 and ICAD in cells during apoptosis induced by ART. The results showed that ART could significantly inhibit the proliferation of HL60 cells in timeand dosedependent manner. After treating HL60 cells with ART for 48 hours, the IC50 values was 18.33μg/ml and its inhibition effect contributed to the induced apoptosis. Bcl2 and ICAD proteins both all expressed in HL60 cells, the level of expression declined as concentration increased. It is concluded that artesunate may induce apoptosis of HL60 cells in vitro, Bcl2 and ICAD may be an important control factor in the signal transduction pathway of ARTinduced apoptosis. Key words artesunate; HL60 cell line; apoptosis 青蒿琥酯（artesunate，ART），是具有倍半萜内酯类抗疟药青蒿素的衍生物，其除具有高效抗疟作用外，对多种肿瘤细胞均有诱导凋亡作用［1，2］。本研究观察了青蒿琥酯对HL60细胞的凋亡诱导作用及凋亡过程中bcl2和ICAD的表达情况，以便为青蒿琥酯作为抗白血病药物应用于临床提供理论基础。 材料和方法 药物和试剂 注射用青蒿琥酯为桂林南药股份有限公司产品，批号 041101，5%碳酸氢钠1 ml溶解后，用RPMI 1640配制所需浓度；碘化丙啶（PI）、噻唑蓝（MTT）为Sigma公司产品；细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒购自北京博大泰克生物基因技术有限公司；bcl2和ICAD单克隆抗体均为美国Santa Cruz公司产品。 细胞系及细胞培养 急性早幼粒细胞白血病细胞株HL60由浙江大学医学院附属第二医院肿瘤研究所提供。细胞按常规悬浮细胞培养法培养于含10%热灭活小牛血清的RPMI 1640培养液中，置37℃、5% CO2培养箱中培养。每2-3天传代1次，取对数生长期细胞进行实验。 MTT测定 取对数生长期