杀螟硫磷降解菌Burkholderia sp.FDS-1的分离鉴定、生物学特性和有机磷水解酶基因（mpd）的克隆及表达.pdfVIP

一一一一~— 一一一一一一一兰这巡夏 杀螟硫磷降解菌B脚肋odelraiPs.FDs一1的分离鉴定、生物学特 性和有机磷水解酶基因(即动的克隆及表达 摘 要 从长期受杀螟硫磷污染的土壤中分离到一株以杀螟硫磷为唯一碳源进行生长的 细菌，经生理生化鉴定和16srDNA同源性比较力伯克霍尔德氏菌属B(u确口2凌产ais闪， 将其命名为FDs一1(GenB助玉Accession肠，盯550913). 对FDs一1的生物学特性进行研究，该菌株在pH6.压7.0生长最好，最适生长温度为 03℃，在5一1。叭 的盐浓度范围生长较好，以葡萄糖为碳源，以有机氮为氮源的培养基中 生长较好. 对FDs一1的降解性能进行研究，该菌株降解杀螟硫磷的最适pH值为70，最适温度 为3。℃，降解杀螟硫磷的速率和起始接种量呈正相关，在浓度为1份500m姚 范围内，杀 螟硫磷能迅速降解.通过液相色谱分析，该菌株能在hl内将Ioomg几的杀螟硫磷转化 为3一甲基一4一稍基苯酚(MNp)，在01h对将MNp完全降解，转变成为部甲基对苯二酚 (MHQ)，并且在降解过程中检测到亚稍酸盐的存在，可以推断出FDs一1降解杀螟硫磷的 部分代谢途径:杀螟硫磷”卜仆矽~MllQ. 在酶学方面，建立了简单、可靠的有机磷水解嗽粗吻活性定量测定方法，测定了环 境因素对其活性影响及其动力学参数.该有机磷水解酶水解杀螟硫磷的最适为pH值 7一5，最适反应温度为03℃;粗酶液在02一40℃稳定性良好，在pH7.0一80.酶能保持较高的 活力，在乙醇中酶的活力最高，在有金属离子存在时均会对酶有一定的抑制作用，其对 酶的抑制率与金属离子的浓度呈正相关.通过酶的定域试验表明，该菌株的有机磷水 解酶存在于细胞内，为胞内酶. 在分子生物学方面，通过构建基因组文库，克隆到两个有机磷水解酶基因 (2即Jl刀，刃)，运用在线分析软件，推断出两个有机磷水解酶的结构基因，信号肤及启动 子序列，发现信号肤及启动子序列完全不同.根据基因序列分析结果设计特异性引物，通 过PcR扩增到有机磷水解酶结构基因，并将其构建到表达载体pET29a中转化到三ocli BLZ工田E3)中，进行了表达. 通过根癌农杆菌介导，将有机磷水解酶基因(即刃转入白三叶草中，根据PcR、 南京农业大学硕 卜论文:杀螟硫磷降解菌及￡渤odel尸aiPsFDS一1的分离鉴定、生物学特性和有机磷水解酶基因(mp刃 的克隆及表达 RLPcR及有机磷水解酶活测定结果，表明该基因已在白三叶草中成功获得表达，在植 物修复污染土壤方面进行了初步尝试. 应用降解菌株Bur肋olderaiPs.FDs一1，在实验室条件下模拟进行有机磷污染土壤 的生物修复研究，该菌株降解杀螟硫磷的最适温度为03℃，最适pH7.5，农药的初始浓度 对降解影响较大，在高浓度(020m叭9)时由于中间产物的毒害而抑制菌体生长从而抑 制降解活性，接种量与降解速率呈正相关，最适接种量为01“个细胞/g土壤.该实验为今 后进行杀螟硫磷污染土壤的原位生物修复系统设计提供有用的实验数据. 关键词:杀螟硫磷;生物降解有机磷水解酶mp;d基因;生物修复;根癌农杆菌 英文摘要 ISOLATIONANDCHARACTEFJZATIONOF FENITROTHION一DEGRADINGSTRAINFDS一1B(urkh0I￡eIria，P.)， CLONINGANDEXPR更SSIONOF泪甲DGENE ABSTRACT Abacterlurnsratinwasisolatedrofm fenjtrohtion-coI1t剑的1刀atedsoil，whichwas cpabaleofutilizingnfeirto面onashte soleracbnosourceofritsglOwtll.T拓sbacterium was identifiedPreli而nrailyasBur从odelraisP.b朗deonitsPhysiological歇ldbiochemical 即alysesnadl6SrD卜Asreie