生物合成咖啡酸苯乙酯体系的液相色谱-串联质谱快速分析.pdfVIP

第38卷 分析化学(FENXIHuAxuE)研究简报 第11期 of 1657一1660 2010年11月 CllineseJ伽malAIlalytiealChemigtry DOI：10．”24／SP．J．1096．2010．01I研 生物合成咖啡酸苯乙酯体系的液相色谱-串联质谱快速分析 卢定强“2 蒋奔1 王俊13赵辉1 凌岫泉1 柴宏1 夏亭3 1(南京工业大学药学院，南京210009)2(江苏省药物研究所，南京210009) 3(江苏科技大学生物与环境工程学院，镇江212018) 摘要建立液相色谱-串联质谱(LC．Ms／Ms)检测生物合成咖啡酸苯乙酯体系中咖啡酸(ca能icacid，cA) 和咖啡酸苯乙酯(caic北id 反应监测(SRM)模式检测。以y(乙腈)：y(水)：y(冰醋酸)=55：45：O．5为流动相，流速1．0mL／IIlin，Hypersil c协色谱柱分离并检测生物合成咖啡酸苯乙酯体系中的咖啡酸以及咖啡酸苯乙酯的含量，并对生物合成咖啡 酸苯乙酯的收率进行了动力学分析。本方法在进样量为O．2—20峭时具有良好的线性关系，咖啡酸和咖啡 酸苯乙酯样品的加标回收率分别为93．4％一98．2％和90．3％一9r7．8％，相对标准偏差分别为1．79％一 2．56％和1．82％一3．67％，咖啡酸苯乙酯收率在3d内可以达到15．54％，表明本方法简便、快速、可靠。 关键词液相色谱一串联质谱法；咖啡酸苯乙酯；咖啡酸；生物(酶)合成体系 1 引 言 咖啡酸苯乙酯(Ca虢ic∞idphenethyl J、抗病毒、抗菌、消炎、抗动脉硬化及提高免 醇酯，是蜂胶中的主要有效成分，具有抗氧化…、抑制DNA【2 疫力等多种药理活性，其中抗肿瘤活性最为显著，是当前新药研发的热点化合物。咖啡酸苯乙酯的制备 方法大致包括：植物提取法、化学合成法”1和生物合成法【3J。生物合成法耗时，但具有合成条件温和、 操作简单、成本低等优点，72h内咖啡酸苯乙酯转化率可以达到15．54％，是广泛采用的制备方法。 有关咖啡酸(Ca虢icacid，CA)和咖啡酸苯乙酯测定已多有报道，包括不同样品来源，如蜂胶H1、红 景天(Rhodiohsacm)J、苹果汁【6’等，采用的测定方法主要有薄层色谱法J、毛细管电泳法【sJ、气相色谱 法一1及高效液相色谱法【41等。但是，已报道的检测方法多适用于包含咖啡酸及其衍生物等多组分的天然 产物的分离检测，操作繁杂，不适于咖啡酸苯乙酯生物转化体系中咖啡酸和咖啡酸苯乙酯的分析。本研究 对咖啡酸的生物转化进行了研究，建立了简单快速的测定生物合成咖啡酸苯乙酯体系中咖啡酸和咖啡酸 苯乙酯的液相色谱一串联质谱方法。通过对咖啡酸苯乙酯生物合成体系中咖啡酸苯乙酯含量及其酶促 反应动力学的测定和研究，以便于在化工设计和反应分离耦合的方向来提高生物法的工业化效率。 2实验部分 2．1仪器与试剂 MicroIn鹊s Micm wate磁695型高效液相色谱仪、WatersQuattro API型三重四级杆质谱仪，ESI源， 电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；Milli-Q超纯水器(美国Millipof；e公司)。 咖啡酸(南京泽朗医药科技有限公司)；咖啡酸、咖啡酸苯乙酯标准品、诺维信脂肪酶435(Si舯a公 过滤的去离子水；氮气、氩气(99．999％)；其它试剂均为分析纯。 2．2色谱-质谱条件 (1)液相色谱条件H)，pe璐ilc。8分析柱(250mm×4．6咖i．d．，5斗m，大连依利特公司)；流动 2010旬1J09收稿；2010JD4．1l接受 资助项目 ·E—mail：IⅢIiI唱qi∞g@njut．edlI．吼 万方数据 1658 分析化学 第38卷 相：y(乙腈)：y(水)：y(冰醋酸)=55：45：0．5；流