变性高效液相色谱技术在检测猪未知多态方面地研究.pdfVIP

636Ⅲ中国动物遗传育种研究进展 变性高效液相色谱技术在检测猪未知多态方面的研究① 王焕岭 王恒 朱正茂 杨述林任红艳 冯书堂 李奎’ 。(中国农业科学院畜牧研究所，北京，100094) 结果是一致的，因此认为DHPLC方法在检测未知突变中是一个稳定快速准确的方法。 关键词：DHPLC；SNP；测序；猪 随着现代科学技术的发展，各种检测SNP的方法也应运而生，从传统的检测技术如DNA测序，限制 术…，它的基本原理是利用在部分变性条件下同源、异源双链DNA解链的难易程度不同使其在色谱柱 中保留的时间不同，异源双链因有错配区的存在而易解链，故而在柱中保留时间短于同源双链怛J。由于 其快速经济自动化及高通量等特点不仅在医学得到了广泛的应用及发展，而且在农业中的应用也越来 越广泛。 1材料和方法 1．1材料 1．1．1猪DNA样品 猪血样采白中国农业科学院畜牧研究所猪场，DNA按照常规的苯酚～氯仿抽提法提取。 1．I．2试剂 TEAA(色谱纯，PE，美国Tral*genomic公司)，引物合成及测序在北京障亚公司。 1．1．3仪器 变性高效液相色谱仪(美同Transgenomic公司)，PCR仪。 】．2方法 1．21引物设计及PCR扩增 Pie— 根据本实验室构建的猪胚胎骨骼肌cDNA文库的测序结果并结合比较基因组的方法，用Primer mier 检测。回收测序。 1．2．2DIIPLC检测 将PCR产物放人色谱仪中，在50℃非变性温度下对扩增的样品进行纯度检测，然后根据其序列用 项目(G2000016103)资助 生堕—堕637 1．2．3序列测定 对于峰图不同的样品每种挑取两个个体进行双向测序，以确定其多态，测序结果在DNAstar中分析。 2结果和讨论 位点。并且对于峰型相同随机挑取两个直接测序，其直接测序的结果也是一致的，如图2和图3。由于 ～种非常经济快速且稳定的检测与法。 图1 50℃非变性条件的检测结果 图262．5℃部分变性条件下的检测结果 阁3测厅峰图 剂、洗脱梯度”’等，DHPLC是一个非常精密的仪器，如产物不纯，就可能会检测到杂峰而导致错判。 多研究领域中。 参考文献 11]OefnerPJ，Underhill DNA by PA．Comparativesequencingdenaturinghigh—performanceliquld Hum (DHPI．c)．AmJ Genet，1995，57：A266 Areview．Hum 12]XiaoW，Oefner Murat，2001，17： PJ．DenaturingHigh—performanceLiquidChromatography 439～474 152—154 [4]白桦，邓大君，潘凯枫．变性高效液相色谱在分子生物学中的应用．国外医学分子生物学，2003，25 (4)：303～305 638∞中国动物遗传育种研究进展 of Perfiwtmmee StudyDenaturingHigh LiquidChromatography in UnknownSNPs DetectingPig Zhu ShulinRen Fen LiKui Wang