HIV-1病毒的核酸异质性与准种特点的研究.pdfVIP

13．HIV一1病毒的核酸异质性及准种特点的研究 深朝I市东湖医院(518020)王辉陆 坚徐六妹李丽雄王火生周伯平 酶对复制的产物缺乏校正功能，因而导致RNA产物常出现高频率的核昔酸替换，产生变异性复制体， 这种变异的特点，表现为型，亚型和准种的特性。其中准种特性因能引起免疫逃逸而倍受关注。对于不 同个体而言，宿主的免疫选择压力与HIV基因变异的关系，目前罕见报道。为了探讨I型人类免疫缺 一1毒株共34株克隆序列进行分析研究，现报道如下。 I材料与方法 500—1 阳性，CD4细胞在36—89个／姗3之间，血浆病毒载量为13670 000拷贝／ml。5例患者均无应用 viral 用德国Roche公司的Highpure RNA试剂盒，严格按说明书分离患者血浆中的HIV—RNA。 RNA 1．2目的片段的扩增用RT—PCR(日本TaKaRa公司One Step 对HIV—lenv基因gpl60部分进行扩增，扩增引物及其条件见表l，最后得到336bp的片段。 表1用于扩增env基因部分片段的引物及反应条件 接好的质粒转入大肠杆菌DHSa感受态细胞中，随机挑取阳性菌落，3例标本分别挑取8个克隆，其余2 例分别挑取5个克隆，共34株，完成阳性克隆的鉴定。 1．4 DNA测序采用内侧正义引物为测序引物，以抽提纯化后的阳性克隆株为测序模板，美国PE Terminator 公司的BigDye Reaction试剂盒，按说明进行测序反应，反应产物经纯化后在美国ABI公司的3 100型基因分析仪上进行测序。 1．5序列分析与数据处理测得序列经DNAStar公司Lasergene 99软件的MegAlign模块，将序列进 行校正后，采用CLASTAL W程序对所测序列进行同源排序，并计算其核营酸的同源性；用Nei和c,ojo． 8．0 对数据进行统计学分析。 2结果 --——109·—-—- 2．1 (75％)。同一患者体内HIV准种株平均为83．5％。 2．2克隆株核苷酸序列同源性分析与比较患者1体内的7株准种克隆株之闻的核苷酸同源性介 于88％～99％之间，与来自其他不同患者的4株克隆株之间的核苷酸同源性为75％，91％，各克隆株之 间核苷酸序列同源性分析与比较详见表2。同一患者各克隆株的核酸序列排列图。 表2相同与不同患者之间各克隆株核苷酸序列同源性分析(％) SZ01一l Szol一2SZ01—3锄l一4锄l一5锄l一6Sz01—7嫩S嬲Sz04S脚 一 卯 89 95 一 “* 舛鳄 鼯 96 一 *制* 田％舛 90 98 一 *“* 蛄鲐卯鳄 88 95 一 H 89 96 一