猪伪狂犬病基因缺失疫苗地研究.pdfVIP

猪伪狂犬病基因缺失疫苗的研究* 倪征杜青云 (浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所，杭州，310021) 摘要：在研究过程中获得一株猪伪狂犬病基因缺失疫苗的毒烈，定名为PRv2毒 株。能适应IBRS一2、BHK2l、PKl5三株继代细胞模型。．实验证明PRY2株最适于I— 鼠有一定的致病力。对家兔、乳猪和妊娠母猪均为安全。免疫乳猪、妊娠母猪均得到 95％以上的保护。 关键词：基因缺失疫苗；伪狂犬病毒 性传染病。主要引起母猪流产、死胎、木乃伊胎以及产死仔、弱仔等繁殖障碍性症状，导致新生 仔猪大量发病死亡，死亡率可达100％。同时对成年猪呈隐性感染或有上呼吸卡他病状，隐性 感染猪和康复猪可以长期带毒和排毒。本病在猪群中的传播途径除接触感染外，病毒还可以 随病猪的分泌物排出，污染饲料、饮水、垫草及栅栏等周围环境。也可通过呼吸道粘膜、皮肤的 伤口以及配种等而发生感染。世界动物卫生组织(OIE)将其列为B类动物疫病，我国将其列 为二类动物疫病。 本病是典型的自然疫源性疾病，已表明约有近40种动物可被感染。人也有感染本病的报 道，特别是接触病死动物的人员可能发生感染。感染者呈严重的寻麻疹症状。血清中检出特异 性抗体。猪是该病最主要的贮存宿主和传染来源。该病最早发现于美国，此后相继传人西欧 各国如德国、法国、意大利等国以及新西兰、日本、我国的台湾和南美的～些国家和地区。目 前，全世界约有40多个国家和地区有本病流行的报道，我国有21个省(市)报道流行，近几年 该病在我国许多省(市)猪场呈爆发流行趋势，给畜牧业尤其是集约化养殖业造成巨大的经济 损失。在我国主要以疫苗接种作为防制该病的主要手段，先后有灭活苗、弱毒苗问世。近年来 随着分子生物技术的发展基因缺失疫苗因其在安全性、免疫原性、检测区分疫苗接种和野毒感 染动物、控制伪狂犬病病毒潜伏感染方面具有无可替代的优势而成为新的热点。我们获得了 1株伪狂犬基因缺失苗，本实验对其的部分特性进行了探讨和研究。 1材料与方法 作者简介：倪征(1979一)女．研究实习员．学士．主要从事动物病毒学方面的研究。 △获三等奖 ·62· 1．I材料 1．I．1伪狂犬病病毒PRV2毒株 1．1．2细胞株乳猪肾上皮细胞IBRS一2继代细胞；地仓鼠肾BHK2．继代细胞及猪肾上 皮细胞PKl5继代细胞。均由本实验室保存。 1．1．3实验动物3 13龄乳鼠和小白鼠购于药监所；健康家兔购于农科院兔场；乳猪和 妊娠母猪购于当地养猪场。 1．2方法 用MEM培养基在37℃恒温箱进行细胞培养。待生长成单层后PRV2毒株接种用。 维持液以病毒含量最终浓度10％继续培养，并设正常细胞作空白对照。16小时左右开始观 察．待细胞病变(cPE)出现80％时收获，连续传代，直至CPE出现时间稳定为止。 1．2．3PRV2株毒价测定用PRV2株细胞病毒液第3代、第4代、第5代以lO倍从lO。 37℃培养。 1．2．4PRV2株的安全试验 1．2．4．13日龄乳鼠安全试验取3日龄乳鼠21只，分3个试验组，每组5只；另设1个对 0．05m1分别后腿外侧皮下接种；对照 照组6只。用PRV2毒株t0000万、100万、1万TCIDso 组注射0．05lIll正常细胞培养液。 1．2．4．2小自鼠安全试验取重约229小白鼠，分组和接种方法同3日龄乳鼠接种试 验。 和2ml于右腹皮下；另设1只作为对照，接种细胞培养液lml。 组注射细胞培养液lml。 1．2．4．5妊娠母猪安全试验取怀孕3周和9周的妊娠母猪，分别颈部肌肉注射108 TCIDmPRV2毒株2ml。另取一头注射正常细胞培养液2ml作为对照。观察对妊娠母猪的影响。 1．2．5PRV2株的免疫效力试验 1．2．5．1乳猪免疫试验用制备的020603批号伪狂犬病基因缺失疫苗免疫10日龄乳 猪，每头猪颈部注射lml，24天后，采血并用强毒100TCID50攻击o 别免疫妊娠3周和9周的母猪，于颈部肌肉注射，每头2ml。当免疫母猪分娩后仔猪达7日龄、 30日龄、6013龄时。取其所产仔猪进行采血。测定仔猪体内不同日龄的母源抗体的消长情况。 2结果 2．1 PRy2株在三种细胞上的繁殖特性和敏感性PRY2具有泛嗜性，均