丝状真菌木聚糖酶的组成与性质研究.pdfVIP

木聚糖酶 丝状真茴末聚糖酶的纽威和性质研究 昊克，蔡敬民，潘仁瑞，刘斌，张洁 (合肥学院生物与环境工程系，合肥230022) 摘要：本试验研究了黑曲霉A3(AspergillusA3)和术霉T6(Trichoderma niger sp．T6)的木 聚糖酶固体培养条件。通过收集它们的培养物浸出液，经过多步分离纯化后，获得不同组分 的木聚糖酶纯酶，并进一步测定了这些纯酶的酶学基本性质。 关键词：黑曲霉；木霉；木聚糖酶；组成；性质 近年来，植物资源作为可再生的资源的开发和利用，越来越受到广泛重视。由于现代生物技术的 飞速发展，使得植物资源的开发和利用步伐加快。植物组织中的半纤维素不包括果胶和纤维素等碳水 化合物，传统上被归类为以糖的残基作为主链的分子。它结构复杂，很少有均一的多聚体或是完全直 线性结构。木聚糖是其中的一种，占植物碳水化合物总量的1／3。因此，对木聚糖的开发利用与纤维 素具有同样重要的意义。 木聚糖酶(Ec 3．2．1|8)为一类水解木聚糖分子中阻l，4-木糖苷键的酶，由多种微生物产生。其水 解产物以寡木糖为主。寡木糖具有特殊的生理功能(胡学智，1997)，可增殖动物肠道内的双歧杆菌， 2000，刘斌等，2001)。为了进一步了解丝状真菌木聚糖酶的组成和性质，我们对这两菌株所产的木聚 糖酶进行分离纯化并进行其基本性质比较，以便为酶制剂的生产和应用创造条件。 1材料和方法 1．1菌种 A3)、木霉T6(Tr／choderma 黑曲霉A3(Aspergillusniger sp．T6)。菌株由课题组分离纯化。 1．2培养基 PDA培养基：马铃薯200g／L，蔗糖20g／L，琼脂20g／L。 243 酶制剂蔫勰景燥糕编而丽丽『—————————————一 待用。 菌待用。 1．3主要化学试剂 Larchwood A-50为进口分装，其 G-25、G-100和DEAE-Sephadex xylan系Sigma公司产品，Sephadex 余试剂均为分析纯。 1．4分析测试方法 1．4．1木聚糖酶活力测定 单位。 1．4．2蛋白质测定 1．4．3聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳 按Davis法(Davis，1964)，凝胶浓度为7％，腽s—Gly缓冲液pUS．3电泳。 1．4．4等电聚焦电泳 3—10)小管电泳。 参照Vesterberg(1972)的方法。采用两性电解质Phatwalyte(pn 1．5粗酶制剂制备和纯化 1．5．1粗酶制备 黑曲霉A3菌株接种在盛有麸皮、蔗粉的固体培养基的500ml三角瓶中28℃培养3天后，固体曲 4．6，0．2 用pH mol／L醋酸缓冲液浸提，过滤，滤液为木聚糖酶粗酶液。 mol／L醋酸缓冲液浸提，过滤，滤液为木聚糖酶粗酶液。 1．5．2硫酸铵盐沉淀 向粗酶液中缓慢加入固体硫酸铵至65％饱和度，静置过夜，离心，收集沉淀。 1．5．3乙醇沉淀 mol／L醋酸缓冲液中，加入冰冷乙醇，静置，离心，收集沉 将上步沉淀的样品溶于pH5．6，0．02 淀。 1．5．4黑曲霉木聚糖酶的纯化 mol／L醋酸缓冲液中，离心去除孢子，再上样 将乙醇沉淀的黑曲霉木聚糖酶样品溶于pH5．6，0．02 G-100柱(3．0×100till)，用同一缓冲液洗脱。然后待流出一定体积 于用同一缓冲液平衡的