仔猪副伤寒活疫苗半合成培养基的研究Ⅱ生产工艺与保存期试验.pdfVIP

中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会论文集 部分用咔唑试剂检出，按检出曲线收集其中单一区域部分，再以乙醇丙酮处理，分别得到粗品AH一1及AH G一100凝胶柱层析精制即得精品AH一1和AH一2。由于我们研究的目标是动物用疫 一2，再通过Sephadex 苗的佐剂，生产的成本不能太高，如按上述生产工艺生产，它的成本是动疫苗不能承受的，同时尚无研究证明 精制过程中弃去的成分全为无效成分，因此我们参照上述提取工艺，结合传统的煎煮法和水提醇沉法，并进 行简化，摸索黄芪多糖提取工艺的最佳条件。 由黄芪多糖分离条件试验结果可以看出，不同的乙醇浓度对沉淀物的重量有影响，乙醇浓度越高，沉淀 物越多，这是由于黄芪水提取物中有很多醇不溶性成分，随着乙醇浓度的增高，更多的醇不溶性成分沉淀下 来，因而沉淀量随着乙醇浓度的升高而增加。由表中结果还可以看出，随着乙醇用量(洗涤次数)的增加，沉 淀物的质量逐渐减少，黄芪多糖的百分含量逐渐升高，这是由于沉淀物中可溶于乙醇的非多糖类成分被多次 溶出，而多糖类成分不溶于高浓度乙醇的结果。 由优化黄芪多糖煎煮条件实验结果可以看出，黄芪多糖的收率随着提取次数的增加、加水量的增加而升 高，这是由于黄芪多糖在药材内外存在不同的渗透压。提取次数的增加、加水量的增加，可以增大多糖类成 分在药材内外的渗透压差，因而溶出的多糖类成分增加。但黄芪多糖的收率并没有随着煎煮时间的延长而 增加，这是由于当煎煮达到一定时间后，黄芪多糖在药材内外的渗透压达到平衡，就不再溶出了，因而黄芪多 糖的收率不随着煎煮时间的延长而增加。 由本试验结果证明，提取黄芪多糖的最佳工艺为：用12倍量的水提取3次，每次30min，提取液浓缩后， 用度浓为80％的乙醇洗涤4次，将沉淀物干燥至恒重。这种提取工艺成本较低，简便易行，制备的黄芪多糖 收率可达到8．4％左右，纯度达到50％以上，可以进行兽医临床推广应用的研究。 参考文献 [1]李范珠与李永吉．中药制药专业生产实习与毕业设计指南．第一版．沈阳：辽宁科学技术出版社，1995．240—252． [2]耿霞，梁冰，梁玉祥，李世杰．苯酚一硫酸导数光谱法快速测定中药中多糖的研究．四川大学学报(工程科学版)．2002．34(3)：62—64 [3]肖崇厚主编，中药化学，上海科学技术出版社，1987，414—415． 仔猪副伤寒活疫苗半合成培养基的研究Ⅱ生产工艺及保存期试验 马振宇1，张大鹏1，刘 欣2 [摘要]对半合成培养基生产仔猪副伤寒活疫苗进行生长曲线的摸索及成品保存期试验。结果表明，半合成培养基 生产仔猪副伤寒活疫苗，17h菌数最高，13h冻干存活率最高，综合考虑冻后头份在15h收获为好，成品在一15％保存15个月菌 数基本不变。 [关键词]仔猪副伤寒；活疫苗；半合成培养基；生长曲线；保存期 在半合成培养基成功的应用于仔猪副伤寒活疫苗的生产后，为进一步确定合适的生长曲线及应用该培 养基所生产疫苗在一15。C的保存期，作者对生长曲线及保存期进行了试验。现将试验结果报告如下： 1 材料 1．1菌种猪霍乱沙门氏菌弱毒株C500，由中监所提供。 1：’2培养基半合成培养基按文献[，3进行配制。 1．3样品应用半合成培养基生产的仔猪副伤寒活疫苗及按《规程》培养基生产的对照疫苗由辽宁益康生 物制品有限公司菌苗班按文献‘1]方法制备。 ——203 ofthe10th of AssociationofAnimaland Science Branch,Chinese Veterinary ProceedingsSymposiumBiological 2方法与结果 表1 半合成培养基生产仔猪副伤寒活疫苗生长曲线的测定结果 2．1生长曲线的测定将配制好的半合成培养基按文献【1]介绍的方法进行发酵罐培养，在培养的不同 时间取样活菌计数，并加入保护剂后进行冻干，冻干后恢复原量进行活菌计数，计算冻干存活率，冻干存活率 的计算方法见文献怛J。结果见表1。 从表1可以看出，试验的3批结果基本一致，在培养17h时菌数最高，培养到13h时其菌液的冻干存活 率最高，培养15小时冻干后的菌数最高。综合培养菌数及冻干存活率两项因素考虑，培养15小时收获较为 合适。 2．2保存期的测定将应用半合成培养基生产的仔